豬DCD供肝常溫機械灌注保存及其對膽管保存損傷的影響.pdf

1、目的：肝移植是治療各種終末期肝病肝功能衰竭可靠、有效途徑。擴大供體器官來源，增加可以安全使用的供體器官數(shù)量，是解決供體器官相對短缺的有效方法，因此提高和改善心臟死亡后捐獻器官的質(zhì)量(Donation after circulatory death,DCD)至關(guān)重要。低溫冷保存（UW液，0-4℃）利用低溫條件下細胞酶反應(yīng)速率降低，對供肝可以保存20小時以上，一直以來被作為供肝保存的標準方案，但是，DCD供肝由于在器官獲取前血流動力學(xué)不穩(wěn)定

2、，相對于其他類型器官捐獻方式經(jīng)歷了較長熱缺血時間，此標準方案的保護作用明顯不足，肝移植后缺血性膽管損傷（Ischemic-type biliary lesions）、移植物功能恢復(fù)延遲（Delayed graft function, DGF）和原發(fā)性移植物無功能（Primary graft nonfunction, PNF）等并發(fā)癥高發(fā)，亟需尋求更佳的器官保存方案。常溫機械灌注（Normothermic machine perfusio

3、n, NMP）模擬人體的生理條件，持續(xù)向供肝泵入氧合含血灌注液，在常溫下維持細胞的生理機能及代謝。本研究擬構(gòu)建簡單、穩(wěn)定、實用的NMP系統(tǒng)，并探討NMP對豬DCD供肝保存期間膽管的保護作用及其機制。
　　方法：實驗分為兩部分：第一部分，NMP對豬 DCD供肝膽管的保護作用。首先，構(gòu)建NMP保存裝置：采用離心泵、氧合器、恒溫水浴箱、連接管路、壓力感受器、流量計等部件構(gòu)建離體肝臟NMP保存裝置，其次利用NMP器官保存裝置對6只巴馬小型

4、豬離體肝臟進行NMP保存，觀察并比較灌注保存期間門靜脈和肝動脈的壓力及流量、肝臟溫度、灌注液的生化指標、膽汁分泌以及膽管病理等指標變化。第二部分，研究機械灌注對豬DCD供肝保存期間膽管的修復(fù)作用：選用健康的巴馬小型豬24只，體重30-35Kg，雌雄不限，豬齡在10個月份以上，由解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，隨機分為兩組，心臟停跳40min后，NMP組以NMP保存6h，UW液組以UW液單純低溫保存6h，然后兩組均行原位肝移植手術(shù)，

5、分別于保存6h及再灌注后取膽管標本，行病理學(xué)及免疫組化染色。
　　結(jié)果：1.成功建立了NMP保存裝置，對小型豬肝臟體外灌注保存過程中，穩(wěn)定控制溫度、門靜脈和肝動脈的壓力和流量，灌注保存液中ALT、AST、ALP、乳酸等指標在保存開始時出現(xiàn)較高水平的升高，之后維持在穩(wěn)定水平，6h的膽汁分泌總量為27.6±0.59ml,采用Hansen提供的評價膽管損傷的半定量評分方法，兩組組織學(xué)評分分別為（12、10、9、8、7、10）VS（6、8

6、、7、7、5、9），有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。2.NMP組與冷保存組術(shù)后5天的存活率分別為100％和0，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），NMP組的ALT、AST、LDH、Lac指標均低于冷保存組，兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），膽管病理也顯示NMP組膽管損傷明顯輕于冷保存組。實驗組膽管上皮及PBG結(jié)構(gòu)顯示彌漫的Ki-67染色的細胞，提示近期有細胞增殖。相反地，對照組Ki-67染色的細胞幾乎沒有。vWF染色顯示對照組膽管周

7、圍靜脈叢出現(xiàn)較多的血小板聚集。
　　結(jié)論
　　1. NMP保存期間可以逆轉(zhuǎn)熱缺血后器官的能量匱乏狀態(tài)，通過持續(xù)提供氧氣及營養(yǎng)底物，對供體器官有很好的保護作用。
　　2.利用常溫機械灌注裝備修復(fù)熱缺血器官時，對于熱缺血時間較長的器官也需進行較長時間的修復(fù)。
　　3.機械灌注對膽管的保護作用及促進膽管屏障的恢復(fù)有利于阻止NAS發(fā)生。對于已經(jīng)受損的膽管，NMP通過對PBG、PVP的保護作用，促進膽管上皮細胞再生也能起到