低溫機(jī)械灌注在邊緣供腎保存中的優(yōu)勢(shì)及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　建立家兔腎臟在體機(jī)械灌注與冷保存模型;低溫機(jī)械灌注對(duì)比傳統(tǒng)冷保存在邊緣供腎保存中的優(yōu)勢(shì)并探討其機(jī)理。
　　試驗(yàn)分為兩部分
　　第一部分:建立家兔DCD(DonationAfterCardiacDeath, DCD)腎臟在體機(jī)械灌注與冷保存模型。
　　方法:健康成年家兔10只,雌雄不限,體重(3.0±0.3)Kg,隨機(jī)分為低溫機(jī)械灌注組(MP組)與靜態(tài)冷保存組(CS組),每組5只。MP、CS組均開腹,游

2、離腎動(dòng)、靜脈,夾閉腎動(dòng)、靜脈35分鐘,開放血流60分鐘后腎動(dòng)脈穿刺置管行冷灌洗并將腎臟移至體外, MP組灌洗后接 Lifeport(美國 Organ Recovery Systems公司),選擇20mmHg灌注壓,4小時(shí)低溫機(jī)械灌注;CS組灌洗后將腎臟放入器官保存液中并低溫保存4小時(shí);每半小時(shí)測(cè)量一次兩組保存液的溫度。4小時(shí)后移除MP、CS組動(dòng)靜脈所置導(dǎo)管并縫合血管,開放血流,左腎復(fù)灌、復(fù)溫,切除右腎,膀胱造瘺留置尿管。術(shù)前、術(shù)中2小時(shí)

3、(B2)、術(shù)畢(B3)檢測(cè)三次血?dú)獠?jù)此調(diào)整水、電解質(zhì)與酸堿平衡。夾閉腎動(dòng)、靜脈期間每5分鐘記錄一次體溫。MP組器械灌注期間每小時(shí)記錄一次灌注流量。術(shù)后記錄24小時(shí)尿量與生存率。
　　第二部分:機(jī)械灌注與冷保存對(duì)免腎保存效果比較研究
　　方法:健康成年家兔15只,雌雄不限,體重(3.0±0.3)Kg,隨機(jī)分為假手術(shù)組(SO組)、低溫機(jī)械灌注組(MP組)及冷保存組(CS組),每組5只。SO組開腹游離腎動(dòng)、靜脈; MP組復(fù)制機(jī)械

4、灌注模型,CS組復(fù)制冷保存模型。24小時(shí)后摘取腎臟標(biāo)本,心臟取血液標(biāo)本。檢測(cè)血清指標(biāo):肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)(自動(dòng)生化儀檢測(cè))、L-6(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)。腎臟組織檢測(cè)指標(biāo):ICAM-1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平(實(shí)時(shí)熒光定量PCR)。NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況(免疫組織化學(xué)),腎組織病理學(xué)改變(HE染色,光鏡觀察)。
　　結(jié)果:
　　第一部分:1、體溫:腎動(dòng)、靜脈夾閉期間各組家兔體溫較為恒定,組間、組內(nèi)無明顯差異

5、(P>0.05)。
　　2、灌注流量:60min及此后的時(shí)間點(diǎn)流量顯著高于0點(diǎn),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);其他各時(shí)間點(diǎn)灌注流量也高于0點(diǎn),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3、24小時(shí)生存率:MP、CS組24小時(shí)生存率均為100％,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　第二部分:1、尿量:SO組、MP術(shù)后24小時(shí)尿量顯著高于CS組(P<0.05);MP組顯著高于SO組;
　　2、血清CRE、BUN:N、

6、MP組CRE、BUN顯著低于CS組(P<0.05=;MP組中CRE、BUN水平顯著高于SO組(P<0.05=;3組組內(nèi)無顯著差異(P>0.05)。
　　3、血清IL-6水平: IL-6表達(dá)CS組高于MP組與SO組,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);MP組顯著高于SO組(P<0.05);3組組內(nèi)無顯著差異(P>0.05)。
　　4、腎臟組織NF-κB p65蛋白表達(dá)免疫組化法檢測(cè),采用Image-Pro Plus6.0圖像定量分

7、析軟件,測(cè)量平均光密度值并對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析。腎臟組織NF-κB p65蛋白表達(dá)CS組高于SO組、MP組,(P<0.05);差異有顯著性意義。SO組與MP組之間無顯著差異(P>0.05)。
　　5、ICAM-1mRNA:RTFQ-PCR檢測(cè),ICAM-1 mRNA:轉(zhuǎn)錄水平CS組高于MP組與SO組(P<0.05),MP組高于SO組(P<0.05),均有顯著性意義。
　　6、腎臟組織學(xué)檢查:HE染色光鏡觀測(cè),SO組腎臟組織結(jié)構(gòu)

8、正常。MP組中腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫,腎小管管徑增大,尤其近曲小管為甚。CS組中腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫,近曲小管與遠(yuǎn)曲小管的管徑均變小。雖然MP、CS組腎小管上皮細(xì)胞均為輕度水腫但是CS組對(duì)比MP組則更為嚴(yán)重。
　　結(jié)論:
　　1、本實(shí)驗(yàn)建立的家兔腎臟在體機(jī)械灌注與冷保存模型穩(wěn)定成功率高,實(shí)驗(yàn)條件易于控制,制作方法簡(jiǎn)單巧妙,適合家免在體腎灌注與冷保存系列研究。
　　2、低溫機(jī)械灌注可降低移植術(shù)后血清中CRE、BUN、I