卡托普利對大鼠腎缺血-再灌注損傷的影響及其機制研究.pdf

1、腎臟為血液高灌注器官，對缺血及缺血-再灌注均敏感。腎缺血，再灌注損傷(I/R)可導致急性腎小管壞死甚至急性腎功能不全。目前，研究認為，腎I/R的病理生理機制非常復雜，涉及多種因素參與，其中炎癥反應發(fā)生是重要因素。而炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和分布又與組織內(nèi)補體系統(tǒng)的活化有密切的聯(lián)系。在治療腎缺血.再灌注損傷過程，人們常常使用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑如卡托普利。希望通過擴張血管盡早恢復血流，減少缺血時間，防止腎缺血再灌注損傷的發(fā)生。 目的：本研

2、究從探討腎缺血再灌注損傷的機制出發(fā)，分析缺血再灌注損傷的關鍵因素以及血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑卡托普利通過何種機制而對腎缺血再灌注損傷起保護作用。 方法：本研究采用結扎一側(cè)大鼠腎血管制備缺血.再灌注損傷模型，通過生化分析檢測腎功能Scr、BUN值，應用病理形態(tài)學和免疫組織化學觀察腎組織變化和相應靶蛋白表達，同時采用ELISA檢測腎組織和血清中炎癥細胞因子IL-6、TNF-α等變化，再應用RT-PCR檢測不同時間炎癥介質(zhì)IL-1β、T

3、NF-α的表達。通過磷酸化抗體、Western blot分析炎癥信號通路中MAPK信號通路的活化程度。比濁法分析血清中補體量的變化。 結果：①發(fā)現(xiàn)大鼠缺血-再灌注損傷1h后，Scr、BUN值開始升高；再灌注2h后，Scr、BUN值明顯上升。②缺血30min再灌注1h后，腎小球有炎性細胞浸潤；缺血30min再灌注2h后，腎小管損害加重，細胞壞死，腎間質(zhì)有大量炎性細胞浸潤。③腎缺血-再灌注損傷中，假手術組以及缺血-再灌注不同時間組，

4、血清中炎癥細胞因子IL-6、TNF-α等的水平無顯著變化。而腎組織中炎癥細胞因子IL-6、TNF-α等水平在腎缺血.再灌注1h、2h后明顯升高。缺血30min再灌注1h后，炎癥介質(zhì)基因IL-1β、TNF-α的mRNA水平明顯上調(diào)。④Westemblot結果顯示，當腎臟缺血30min，腎組織還無灌注時，MAPK信號通路中p38、ERK、JNK通路出現(xiàn)激活。隨著再灌注時間的延長增加，P38、ERK和JNK明顯磷酸化(激活)。當再灌注30mi

5、n時，MAPK的磷酸化程度較顯著，但隨著再灌注時間的延長，MAPK的磷酸化程度無明顯改變。⑤卡托普利(血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑)治療缺血-再灌注損傷后，其BUN、Scr值明顯降低，腎小球內(nèi)炎性細胞浸潤明顯減少，近端及皮髓交界處的腎小管上皮細胞腫脹減輕。同時腎組織中炎癥細胞因子IL-6等水平降低。但是應用卡托普利治療后腎組織中JNK、ERK、P38磷酸化程度仍然較高，與缺血-再灌注損傷組比較無明顯差異。⑥腎組織再灌注時血清中補體總活性( C

6、H50)出現(xiàn)明顯降低，而卡托普利治療后血清中補體總活性明顯恢復。免疫細胞化學發(fā)現(xiàn)，缺血30min再灌注60min后，近端及皮髓交界處的腎小管上皮細胞基底部有補體活化片段C3d沉積，卡托普利治療后補體活化片段C3d數(shù)量和程度明顯減低。western blot分析補體C3活化時的活性片段C3d的表達發(fā)現(xiàn)，當經(jīng)缺血-再灌注損傷(I/R組)后腎組織中出現(xiàn)補體C3的活性片段C3d，而經(jīng)過卡托普利治療(CAP組)后腎組織中活性片段C3d表達量降低。