TAT-N15在潰瘍性結腸炎及炎癥相關性結直腸腫瘤中的治療作用及機制研究.pdf

1、第一部分DSS誘導的潰瘍性結腸炎模型的構建
　　目的：證明DSS誘導的小鼠潰瘍性結腸炎模型構建成功，同時證明PIK3R3在潰瘍性結腸炎中發(fā)揮重要功能。
　　方法：通過DSS誘導小鼠潰瘍性結腸炎模型，檢測臨床指標、病理改變及炎癥細胞的浸潤情況，同時檢測PIK3R3在模型中的表達水平。運用免疫組化的方法檢測潰瘍性結腸炎臨床標本中PIK3R3的表達情況。
　　結果：DSS誘導的模型小鼠體重下降，結腸縮短；結腸上皮結構破壞，炎

2、癥細胞浸潤增多；PIK3R3在DSS誘導的潰瘍性結腸炎小鼠結腸及潰瘍性結腸炎臨床組織標本中呈現(xiàn)高表達。
　　結論：DSS誘導的潰瘍性結腸炎模型構建成功。PIK3R3在DSS誘導的潰瘍性結腸炎模型及臨床標本中表達水平升高，PIK3R3在潰瘍性結腸炎發(fā)病中發(fā)揮重要功能。
　　第二部分TAT-N15在DSS誘導的潰瘍性結腸炎中的治療作用
　　目的：通過DSS誘導的潰瘍性結腸炎小鼠模型，評估TAT-N15在潰瘍性結腸炎中的治療

3、作用，并與陰性對照（對照多肽）及陽性對照（潑尼松龍）做對比。
　　方法：檢測各組小鼠體重情況，結腸長度，疾病活動指數(shù)；HE染色評估各組的病理改變并定量評分；免疫組化Ki-67染色評估上皮細胞的損傷情況；運用real-time PCR、ELISA及流式CBA法評估相關細胞因子的表達。
　　結果：TAT-N15能抑制模型中小鼠體重的下降，降低疾病活動指數(shù)，緩解小鼠結腸長度的縮短；同時能改善病理變化和炎癥細胞的浸潤；降低Ki-67

4、指數(shù)；減少促炎細胞因子的產生。
　　結論：TAT-N15能有效的降低疾病的臨床指標，改善疾病的病理變化，促進炎癥的盡快恢復，減少促炎細胞因子的表達。
　　第三部分TAT-N15對AOM/DSS誘導的炎癥相關性結直腸腫瘤的抑制作用
　　目的：證明 TAT-N15能有效的抑制潰瘍性結腸炎向炎癥相關性結直腸腫瘤的惡性轉化。
　　方法：通過構建AOM/DSS誘導的炎癥相關性結直腸腫瘤模型，給予TAT-N15藥物治療，觀察

5、癌前病變，最終生成腫瘤情況（個數(shù)、大小、分布及負荷等），臨床指標（潰瘍性結腸炎的發(fā)病率，疾病活動指數(shù)，結腸長度），病理改變，腫瘤的增殖和凋亡（Ki-67及TUN EL），以及細胞因子的表達。
　　結果：TAT-N15能有效抑制癌前病變，肉眼可見腫瘤減少，HE染色顯示癌前病變減少；最終形成的腫瘤評估發(fā)現(xiàn)TAT-N15組腫瘤數(shù)量更少，體積更小，荷瘤量更低；臨床指標中：潰瘍性結腸炎發(fā)病率更低，疾病活動指數(shù)更低，結腸長度更長；病理改變更輕

6、；腫瘤的增殖更低，凋亡指數(shù)更高；促炎細胞因子表達更低，抑炎細胞因子表達升高。
　　結論：TAT-N15能有效的抑制腫瘤的癌前病變，抑制最終炎癥相關性腫瘤的生成。
　　第四部分TAT-N15抑制潰瘍性結腸炎的機制研究
　　目的：驗證在動物模型中TAT-N15能有效的抑制NF-κB信號通路；觀察TAT-N15對緊密連接蛋白ZO-1表達的影響及對Treg細胞表達的影響。
　　方法：構建AOM/DSS誘導的動物模型，驗證

7、TAT-N15對p-NF-κB p65表達的影響；體外LoVo細胞中證明TAT-N15對p-NF-κB p65的影響；檢測動物實驗中TAT-N15對ZO-1表達的影響，體外細胞實驗中過表達及低表達PIK3R3檢測ZO-1的表達變化，LPS誘導的結腸滲透模型中檢測TAT-N15對結腸滲透能力的影響；動物模型中，流式細胞學及免疫組化染色檢測TAT-N15對Treg細胞比例的影響。
　　結果：在AOM/DSS誘導的動物模型中，TAT-N

8、15能有效的抑制p-NF-κB p65蛋白及p-STAT3蛋白水平，增加了 ZO-1蛋白的表達，同時可升高 Treg細胞的比例；細胞實驗中，TAT-N15對 p-NF-κB p65的表達水平存在時間及劑量依賴關系，能有效抑制p-NF-κB p65表達，對 PIK3R3本身表達無影響；LPS誘導的滲透試驗中，TAT-N15能降低腸道的滲透能力。
　　結論：TAT-N15通過抑制NF-κB通路抑制炎癥，同時增加腸道緊密連接蛋白的表達，