兔膀胱平滑肌細(xì)胞和移行上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及支架復(fù)合物的構(gòu)建.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開(kāi)論述：
　　第一章：兔膀胱平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定。
　　目的：通過(guò)研究兔膀胱平滑肌的體外培養(yǎng)及鑒定方法，為構(gòu)建組織工程新膀胱提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用獺兔在無(wú)菌條件下切除部分膀胱組織，將取下的膀胱分成兩部分，在解剖顯微鏡下將上皮和平滑肌分離，分別采用組織塊法和酶消化法分別獲取原代細(xì)胞，并以含10％FBS的DMEM進(jìn)行培養(yǎng)，觀(guān)察記錄兩種方法由原代培養(yǎng)至傳代所需的時(shí)間和細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中的形態(tài)

2、及增殖情況，通過(guò)免疫組化方法鑒定細(xì)胞。
　　結(jié)果：組織塊法原代培養(yǎng)成功11次，失敗1次，酶消化法原代培養(yǎng)成功6次，失敗6次，兩種方法的成功率有顯著性差異（P<0.05）。組織塊法原代培養(yǎng)至傳代所需的時(shí)間為10.18±0.98天，而酶消化法為4.17±0.75天，兩種方法的原代培養(yǎng)時(shí)間有顯著性差異（P<0.05）。倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，并出現(xiàn)典型的“峰谷”樣結(jié)構(gòu)，傳代細(xì)胞的平滑肌肌動(dòng)蛋白抗體染色呈陽(yáng)性反應(yīng)。
　　結(jié)

3、論：應(yīng)用組織塊培養(yǎng)法能夠更好的提高細(xì)胞體外獲取的成功率，所培養(yǎng)出來(lái)的膀胱平滑肌細(xì)胞純度高，完全可作為構(gòu)建組織工程膀胱的種子細(xì)胞。
　　第二章：兔膀胱上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定。
　　目的：通過(guò)探索兔膀胱移行上皮細(xì)胞的體外分離、原代培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒定的方法,為其作為種子細(xì)胞構(gòu)建新膀胱提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用獺兔在無(wú)菌條件下切除部分膀胱組織，將取下的膀胱分成兩部分，在解剖顯微鏡下將上皮和平滑肌分離，分別采用組織塊法和酶消

4、化法分別獲取原代細(xì)胞，并以含EGF、BPE的DMEM/F12培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，觀(guān)察記錄兩種方法由原代培養(yǎng)至傳代所需的時(shí)間和細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中的形態(tài)及增殖情況，通過(guò)免疫組化方法鑒定細(xì)胞。
　　結(jié)果：組織塊法原代培養(yǎng)成功10次，失敗2次，酶消化法原代培養(yǎng)成功11次，失敗1次，兩種方法的成功率無(wú)顯著性差異（P>0.05）。組織塊法原代培養(yǎng)至傳代所需的時(shí)間為10.00±1.00天，而酶消化法為4.00±0.67天，兩種方法的原代培養(yǎng)時(shí)間有顯著

5、性差異（P<0.05）。倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)呈典型的“鋪路石”樣結(jié)構(gòu)，傳代細(xì)胞免疫組化染色呈陽(yáng)性反應(yīng)。
　　結(jié)論：采用酶消化法可以從較少的組織中在短時(shí)間內(nèi)獲得大量純度高、活力好的膀胱移性上皮細(xì)胞，通過(guò)4一5天培養(yǎng)原代細(xì)胞能融合至80%一90%,表現(xiàn)出典型的”鋪路石”樣結(jié)構(gòu),傳代后細(xì)胞能夠穩(wěn)定生長(zhǎng)，能為構(gòu)建組織工程新膀胱提供可靠的依據(jù)。
　　第三章：兔膀胱平滑肌細(xì)胞及移行上皮細(xì)胞與支架復(fù)合物的構(gòu)建。
　　目的：觀(guān)察膀

6、胱平滑肌細(xì)胞和移行上皮細(xì)胞混合培養(yǎng)在脫細(xì)胞的膀胱支架上的生長(zhǎng)狀況,為組織工程膀胱種子細(xì)胞和支架材料的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將兔膀胱平滑肌細(xì)胞和移行上皮細(xì)胞分別接種到脫細(xì)胞的膀胱支架材料上復(fù)合培養(yǎng),于1周及10天后取出細(xì)胞一支架復(fù)合物,4%甲醛固定行石蠟切片H-E染色電鏡觀(guān)察兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。
　　結(jié)果：石蠟切片H-E染色觀(guān)察脫細(xì)胞的支架，觀(guān)察到其有很好的纖維網(wǎng)結(jié)構(gòu)，未見(jiàn)細(xì)胞殘留。將膀胱平滑肌細(xì)胞和移行上皮細(xì)胞