知母須根與根莖中差異性成分的分析、分離與鑒定.pdf

1、中藥知母為百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloidesBge.)的干燥根莖，為滋陰降火的要藥，具有悠久的臨床用藥歷史。自上世紀(jì)60年代以來，科研工作者對中藥知母中的化學(xué)成分及其藥理活性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)知母中富含甾體皂苷、黃酮、多糖等多種化學(xué)成分，其中甾體皂苷類成分因其含量較高且藥理活性較好而受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。按傳統(tǒng)的藥材加工方法，知母根莖上的須根部分需被去除、丟棄，不僅耗時(shí)耗力而且造成了資源的嚴(yán)重浪費(fèi)

2、。為了綜合利用知母藥用植物資源，本文應(yīng)用UPLC/Q-TOF MSe技術(shù)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析研究知母須根與知母根莖兩者間的差異性成分，并在液質(zhì)指導(dǎo)下對知母須根中的特異性成分展開有針對性的分離純化并最終鑒定其結(jié)構(gòu)。
　　1.利用UPLC/Q-TOF MSe技術(shù)對知母須根與根莖中化學(xué)成分進(jìn)行分析表征，發(fā)現(xiàn)知母須根與根莖中的主要化學(xué)成分具有一致性，且總皂苷的含量處于同一水平；進(jìn)一步應(yīng)用Markerlynx軟件對知母須根與知母根莖中化學(xué)成分

3、進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，找到兩者之間差異性較大的12個(gè)甾體皂苷類化合物，并利用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行了在線快速鑒定。
　　2.在液質(zhì)指導(dǎo)下采用SP825大孔吸附樹脂柱層析、M C I樹脂柱層析、R P-C18柱層析、硅膠柱層析、PHPLC等色譜分離方法，對知母須根中的甾體皂苷進(jìn)行定向分離純化，成功分離得到存在于須根中的7個(gè)差異性成分，總計(jì)分離得到18個(gè)化合物。結(jié)合理化性質(zhì)、高分辨質(zhì)譜、iH-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HSQC及

4、HMBC等波譜分析方法，鑒定了18個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，包括12個(gè)呋甾皂苷、5個(gè)螺甾皂苷和1個(gè)木脂素類成分。
　　知母須根中分離鑒定的化合物結(jié)構(gòu)分別為：26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5β-呋甾-3β，22α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(1)，26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5β-呋甾-3β,22α,26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡

5、萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)β-D-吡喃半乳糖苷(2)，26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(3)，(25S)-5α-螺甾-3β,12β-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-

6、吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(4a)、（25R)-5α-螺甾-3β12β-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖(4b)，(25R)-5β-螺甾-3β-羥基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)，TimosaponinN(6

7、)，薤白苷 J(7)，purprueagitosid(8)，Timosaponin E1(9)，知母皂苷BⅡ(10)，25R-知母皂苷BⅡ(11)，Timosaponin I1(12)，UttrosideB(13)， Timosaponin F(C50)(14a)、 F-gitonin(14b)，KarataviosideC(15)，TimosaponinAⅢ(16)，(25S)-5β-螺甾-3β-羥基-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(

8、1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(17)，右旋丁香樹脂酚(18)。其中化合物3、4、5、12、13、14和15為主要存在于知母須根中的7個(gè)差異性成分，1-5為新化合物。
　　本論文應(yīng)用UPLC/Q-TOF MSe技術(shù)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，建立了快速、有效的比較研究知母須根與知母根莖間化學(xué)成分差異性的分析方法，并在分析基礎(chǔ)上對主要存在于知母須根中的差異性成分進(jìn)行有針對性地分離鑒定，闡明了知母須根與根