吡非尼酮片健康受試者藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、研究背景:
　　特發(fā)性肺纖維化（IPF）是具有致命性的慢性非腫瘤疾病，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康、預(yù)后差，每年整體人群的患病率呈逐漸增長(zhǎng)趨勢(shì)，估計(jì)以每年11％的比例增長(zhǎng)[1]?；颊邚谋辉\斷為IPF之日起平均存活時(shí)間通常是2～5年，患者常因喪失肺功能導(dǎo)致呼吸衰竭而死亡，所以要早期診斷和最佳治療的十分重要。但傳統(tǒng)治療的藥物如皮質(zhì)類(lèi)固醇和免疫制劑不良反應(yīng)較多且療效一般。吡非尼酮是一種新型的廣譜抗纖維化復(fù)合物，主要通過(guò)抑制膠原合成和減少成纖維細(xì)胞增

2、生起抗纖維化作用，比傳統(tǒng)的皮質(zhì)激素療法治療肺纖維化的臨床有效率更高，副作用更小，已被最新版的國(guó)際特發(fā)性肺纖維化指南列為最高等級(jí)的推薦用藥之一。目前關(guān)于吡非尼酮的代謝酶研究較為缺乏，CYP3A4作為一種廣譜的代謝酶，對(duì)多種藥物的口服吸收均有影響。腸道CYP3A4酶的活性可被西柚汁抑制，目前尚未有研究表明CYP3A4與吡非尼酮代謝的關(guān)系。
　　研究目的:
　　目前吡非尼酮在國(guó)外已經(jīng)上市，但在國(guó)內(nèi)尚處于臨床研究階段，屬于3.1類(lèi)新

3、藥，按照新藥注冊(cè)管理辦法需要評(píng)價(jià)其在中國(guó)患者的療效和安全性，其臨床試驗(yàn)劑量多少合適需要做中國(guó)人群的藥代動(dòng)力學(xué)研究。本研究擬開(kāi)展以中國(guó)健康受試者為研究對(duì)象，考察單次不同劑量下，以及多次給藥后吡非尼酮在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的情況，同時(shí)考察不同飲食條件（空腹、高脂肪高能量餐、西柚汁）對(duì)吡非尼酮代謝的影響，為制定吡非尼酮Ⅱ期臨床試驗(yàn)方案和撰寫(xiě)適合中國(guó)患者的藥品說(shuō)明書(shū)提供參考依據(jù)。
　　研究方法:
　　1、本研究以氘代吡非尼酮

4、為內(nèi)標(biāo)，乙腈為蛋白沉淀劑，ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6 mm×100 mm，3.5μm）為色譜柱，乙腈-水（90:10，V:V，含0.005 mol·L-1甲酸銨和0.1%甲酸）為流動(dòng)相，建立人血漿及尿中測(cè)定吡非尼酮和5-羧基吡非尼酮的LC-MS/MS檢測(cè)方法。
　　2、本研究納入10名健康受試者（漢族），男女各半，隨機(jī)分為5組，采用單中心、開(kāi)放、隨機(jī)試驗(yàn)，考察低（200 mg）、中（400 mg）、高（

5、600 mg）三個(gè)劑量的單次給藥和多次給藥（400 mg tid）后吡非尼酮及5-羧基吡非尼酮的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)行為。同時(shí)測(cè)定上述10名健康受試者單次口服低（200 mg）中（400 mg）高（600 mg）劑量吡非尼酮片后0-12 h尿液中原藥和5-羧基吡非尼酮的排泄率。
　　3、本研究另納入10名健康男性受試者（漢族），隨機(jī)分為空腹、進(jìn)食兩組，采用單中心、開(kāi)放、隨機(jī)、雙周期試驗(yàn)，考察單次口服400 mg吡非尼酮后的藥代動(dòng)力學(xué)行為

6、后，再考察西柚汁同服400 mg吡非尼酮對(duì)吡非尼酮的藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　結(jié)果:
　　1、LC-MS/MS法測(cè)定人血漿中吡非尼酮和5-羧基吡非尼酮，其中吡非尼酮、5-羧基吡非尼酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍分別為0.005～25 mg·L-1和0.005～5 mg·L-1，回收率分別為92.08%～96.96%和98.23%～101.08%，準(zhǔn)確度分別為88.27%～101.28%和97.41%～102.53%，批內(nèi)精密度分別為1.

7、04%～5.93%和1.68%～9.26%、批間精密度分別為1.19%～10.7%和0.67%～16.23%，基質(zhì)效應(yīng)分別為87.48%～96.28%和94.05%～98.89%，藥物在溶媒中經(jīng)室溫放置0 h、3 h及冰箱4℃放置1 d、35 d和42 d穩(wěn)定，在基質(zhì)中經(jīng)室溫放置0 h和24 h，QC血漿樣品經(jīng)凍融1次、2次、3次，-20℃凍存1 d、12 d和22 d穩(wěn)定，且檢測(cè)方法的特異性高。
　　2、LC-MS/MS法測(cè)定人

8、尿液中吡非尼酮和5-羧基吡非尼酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍均為0.005～5 mg·L-1，回收率分別為92.23%～101.08%和95.30%～102.26%，準(zhǔn)確度分別為89.73%～104.16%和97.44～109.4%，批內(nèi)精密度分別為1.20%～5.60%和3.34%～9.53%、批間精密度分別為0.96%～2.56%和3.34%～9.53%，基質(zhì)效應(yīng)88.61%～96.32%和91.37%～97.24%，藥物在溶媒中經(jīng)室溫放置0

9、 h、3 h及冰箱4℃放置1 d、35 d和42 d穩(wěn)定，在基質(zhì)中0 h和24 h，QC尿藥經(jīng)凍融1次、2次、3次，-20℃凍存3 d、14 d和47 d穩(wěn)定，且檢測(cè)方法的特異性高。
　　3、在中國(guó)健康志愿者中（男女各半）進(jìn)行的藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示，單次口服給藥吡非尼酮片200～600 mg，吡非尼酮的Cmax分別為5.10±1.50 mg·L-1，9.58±2.67 mg·L-1和14.64±3.46 mg·L-1，5-羧基吡非尼

10、酮的Cmax分別為2.81±1.40 mg·L-1，3.77±1.70 mg·L-1和5.64±3.28 mg·L-1；吡非尼酮的AUC分別為13.89±7.58 mg·h·L-1，29.18±11.16 mg·h·L-1和44.80±18.25 mg·h·L-1，5-羧基吡非尼酮的AUC分別為7.32±3.1 mg·h·L-1，12.96±4.1 mg·h·L-1和20.32±6.68 mg·h·L-1。吡非尼酮的Cmax和AUC均隨

11、劑量增加而增加，其中Cmax與給藥劑量成比例增加，AUC與劑量的比例關(guān)系不明顯。
　　4、多次口服給藥（400 mg tid）吡非尼酮及5-羧基吡非尼酮的Cmax分別為10.09±2.58 mg·L-1和5.04±1.94 mg·L-1， AUC分別為27.12±13.12 mg·h·L-1和17.92±4.86 mg·h·L-1，蓄積因子分別為0.93±0.034和0.91±0.005，顯示吡非尼酮及5-羧基吡非尼酮多次給藥后無(wú)

12、明顯蓄積傾向。
　　5、低（200 mg）、中（400 mg）、高（600 mg）三個(gè)劑量組，尿中12 h吡非尼酮的累積排泄率分別為0.38%、0.38%和0.34%，5-羧基吡非尼酮尿中12 h累計(jì)排泄量占給藥劑量的83.75%、84.35%、81.53%。
　　6、10名健康受試者藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)單次給藥期間共發(fā)生不良事件7例9人次，多次給藥期間共發(fā)生不良事件5例7人次，均為輕度不良事件。
　　7、在中國(guó)健康志愿者中

13、（男性）進(jìn)行的進(jìn)食影響試驗(yàn)研究中顯示，進(jìn)食高脂肪高熱量餐后、西柚汁和空腹給藥吡非尼酮的Cmax分別為5.89±1.10 mg·L-1和5.43±1.16 mg·L-1、11.16±2.95 mg·L-1，AUC分別為21.86±4.57 mg·h·L-1、23.74±5.24 mg·h·L-1和26.62±5.21 mg·h·L-1，t1/2分別為2.17±0.22 h、2.52±0.29 h和2.13±0.31 h，脂肪高熱量餐后和西

14、柚汁均比空腹給藥的Cmax顯著降低，Tmax顯著變大，AUC略降低，脂肪高熱量餐后與西柚汁藥動(dòng)學(xué)參數(shù)相似。
　　8、在中國(guó)健康志愿者中（男性）進(jìn)行的進(jìn)食影響試驗(yàn)研究中顯示，進(jìn)食高脂肪高熱量餐后、西柚汁和空腹給藥5-羧基吡非尼酮的Cmax分別為2.82±0.55 mg·L-1、2.81±0.72 mg·L-1和4.09±0.83 mg·L-1，AUC分別為12.31±3.10 mg·h·L-1、12.19±2.02 mg·h·L-1

15、和14.04±2.19 mg·h·L-1，t1/2分別為2.05±0.21 h、2.13±0.20 h和2.09±0.61 h，脂肪高熱量餐后和西柚汁均比空腹給藥的Cmax顯著降低，Tmax顯著變大，AUC略降低，脂肪高熱量餐后與西柚汁藥動(dòng)學(xué)參數(shù)相似。
　　結(jié)論:
　　1、本文建立了快速、選擇性強(qiáng)、簡(jiǎn)便可靠的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS），并用于測(cè)定人血漿中吡非尼酮和同時(shí)測(cè)定人尿中原形及代謝產(chǎn)物5-羧基吡非尼酮

16、的濃度。
　　2、本試驗(yàn)顯示，中國(guó)健康受試者單次口服給藥吡非尼酮片200、400、600 mg，多次口服給藥（400 mg，tid）后藥動(dòng)學(xué)特征與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究基本一致，在Ⅱ期臨床研究中亦可參照吡非尼酮使用國(guó)外說(shuō)明書(shū)用藥劑量進(jìn)行臨床療效和安全性評(píng)價(jià)。
　　3、吡非尼酮以原型的形式經(jīng)腎排泄很少，主要以代謝產(chǎn)物5-羧基吡非尼酮經(jīng)腎排泄。
　　4、西柚汁和餐后給藥都是使吡非尼酮和5-羧基吡非尼酮的Cmax、AUC降低， Tm