吡非尼酮的大鼠藥物動力學及對細胞色素P450酶活性的影響.pdf

1、第一部分吡非尼酮的大鼠藥物動力學研究 第一節(jié)吡非尼酮大鼠血漿樣品測定方法的建立 建立測定大鼠血漿中毗非尼酮濃度的高效液相色譜法。100μ1血漿中加入2％的冰醋酸(HAC)50μl，混勻后加入醋酸乙酯1.5ml，4000r/min離心5分鐘，吸取有機層50℃水浴中吹干，用300μl流動相復溶后進樣30μl進行分析。色譜柱為ZORBAXC18(4.6×150mm，粒徑5μm；AgilentCo)，預柱為KromasilC18

2、；柱溫：20℃；流動相為水：乙腈：TFA：三乙胺=75：25：0.1：0.12；流速：1ml/min，紫外檢測波長為314nm。以受試品峰面積定量。在此條件下，吡非尼酮在大鼠的血漿濃度在0.2～4mg·L-1和4～100mg·L-1有良好的線性關系，絕對回收率為70.02％～86.55％，相對回收率為95％～104％，日內、日間RSD均小于8％，最低檢測濃度為0.2mg·L-1。本方法靈敏、準確且有較高的回收率。 第二節(jié)吡非尼酮

3、的大鼠藥物動力學研究 SD大鼠25只，雌雄兼有，隨即分為5個劑量組(4個灌胃劑量組，1個靜注劑量組)經(jīng)口灌胃(ig.)組，給予PF，劑量分別為25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg，450mg/kg，給藥容量為1ml/100g；靜脈注射(iv.)給藥組，按PF溶液50mg/kg的劑量經(jīng)尾靜脈給予，給藥容量為0.5ml/100g，用高效液相色譜法測定血漿藥物濃度。分別計算4個灌胃劑量組和1個靜注劑量組的藥物動力學參數(shù)。結

4、果表明4個灌胃組的主要藥代動力學參數(shù)由低到高分別為AUC0-300min：535.00±143.23mg·min·L-1，880.66±315.26mg·min·L-1，2842.25±870.97mg·min·L-1，16200.44±3304.68mg·min·L-1；Cmax：6.24±2.71mg·L-1，8.56±2.31mg·L-1，23.06±8.03mg·L-1，85.67±12.01mg·L-1；Tmax：21.00±

5、8.22min、17±7.58min、27.00±6.71min和48.00±16.43min；Vd：3.74±1.09L、3.28±2.51L、3.04±1.22L、5.02±3.06L；CL：0.05±0.02L/min、0.04±0.03L/min、0.03±0.01L/min、0.01±0.01L/min；t1/2：60.61±23.66min、58.89±28.17min、73.71±31.13min和543.68±828.5

6、4min。靜注組的主要藥物動力學參數(shù)為AUC0-300min：1706.86±494.50mg·min·L-1；Cmax：45.10±15.34mg·L-1；t1/2a：6.83±3.66min；t1/2β：109.20±98.46min；Vd：3.47±1.51L；CL：0.03±0.01L/min。結果表明，PF在劑量范圍為25mg/kg至100mg/kg時，Cmax、AUC與劑量增加呈線性關系，當劑量為450mg/kg時，劑量增加

7、18倍，AUC增加近30倍，呈非線性藥物動力學特征，提示PF在高劑量給藥時，藥酶代謝呈飽和狀。 第三節(jié)吡非尼酮的血漿蛋白結合率的研究 本實驗采用平衡透析法來研究毗非尼酮血漿蛋白結合率的情況，并將人和大鼠的血漿蛋白結合率進行比較。用高效液相色譜法測定平衡透析膜兩側的PF藥物濃度，透析膜一側為空白血漿，另外一側為含PF2mg/L、20mg/L、100mg/L藥物濃度的NaH2PO4緩沖液，平衡時間為24小時。在2mg/L～1

8、00mg/L濃度范圍內，PF人血漿蛋白結合率為66.19％-77.78％，PF大鼠血漿蛋白結合率64.09％-84.92％，可見大鼠在PF中劑量血漿蛋白結合率(84.92±0.59μg/ml)和高劑量下的血漿蛋白結合率(84.27±1.07μg/ml)大于人的血漿蛋白結合率(71.67±0.99μg/ml，66.19±2.16μg/m1)。 第二部分吡非尼酮對大鼠肝細胞色素P450酶活性的影響 第一節(jié)吡非尼酮對大鼠P45

9、0酶總酶活性的影響 采用差示光譜法測定微粒體混懸液蛋白中的P450含量。SD大鼠48只，隨機分成空白組、肝藥酶誘導劑組、肝藥酶抑制劑組，吡非尼酮低劑量組、吡非尼酮中劑量組和吡非尼酮高劑量組?？瞻捉M給予1％CMC-Na，誘導劑組地塞米松100mg/kg，抑制劑組酮康唑40mg/kg，PF低、中、高劑量組分別為PF25mg/kg，50mg/kg和100mg/kg灌胃給藥，一日一次，連續(xù)6日。取大鼠的肝臟制備肝微粒體，測定肝微粒體中的

10、蛋白濃度，用分光光度計對樣品進行比色。結果表明，該藥在中劑量組(50mg/kg)和高劑量組(100mg/kg)的P450含量與空白組比較有顯著性差異(P＜0.01)，提示該藥在較大劑量時對藥酶有誘導作用。 第二節(jié)吡非尼酮對肝藥物代謝酶亞家族CYP3A及CYP2E1的影響作用 采用Nash-甲醛形成法(Nash比色法)來研究吡非尼酮對大鼠CYP3A及CYP2E的影響，配制0.5ml反應液，加入NADPH生成系統(tǒng)啟動反應，3

11、7℃水浴20min后，加入20％ZnSO40.05ml終止反應，混勻后每管再加入飽和Ba(0H)20.05ml，2500g離心15～20min，將0.35ml上清液轉移至另一試管中，加入0.15mlNash試劑，混勻后加入50℃水浴溫孵30min，冷卻后在412nm測定樣品光密度值。結果表明，在給藥6d和12d后，吡非尼酮對大鼠肝微粒體NDMA酶(反映CYP2E1)的活性影響不顯著(P＞0.05)；而吡非尼酮對大鼠肝微粒體ERD酶(反映