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文檔簡介
1、目的:
建立評價大鼠肝微粒體藥物代謝酶細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)不同亞型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的“Cocktail”探針?biāo)幬锶芤旱母咝б合嗌V檢測方法;優(yōu)化肝微粒體孵育條件,建立肝微粒體體外孵育體系,研究丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體該6種主要CYP450亞型體外代謝活性的影響,為臨床合理用藥提供參考。
方法:
2、 選擇CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的特異性代謝底物咖啡因、美托洛爾、奧美拉唑、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和咪達唑侖制備成“Cocktail”探針溶液,建立同時測定該6種探針?biāo)幬镌诟挝⒘sw中的高效液相色譜檢測方法。通過優(yōu)化微粒體蛋白濃度和孵育時間,建立肝微粒體體外孵育體系。研究丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒體內(nèi)6種主要CYP亞型活性的影響。實驗分三組進行:丹參酮ⅡA組、空白對照組和無活性組(不加大
3、鼠肝微粒體組),每組實驗平行三個樣本。應(yīng)用高效液相色譜.紫外檢測(HPLC-UV)法檢測大鼠肝微粒體中丹參酮ⅡA對探針底物代謝剩余量的影響,得到酶活性百分?jǐn)?shù),以丹參酮ⅡA濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo),以酶活性百分?jǐn)?shù)為縱坐標(biāo),使用GraphPad Prism5.0軟件按照非線性回歸,作圖并計算IC50值。評價丹參酮ⅡA在大鼠肝微粒體孵育體系中對CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4體外代謝活性的影響。<
4、br> 結(jié)果:
1.本研究所建立的高效液相色譜方法,可以同時測定6種探針?biāo)幬锟Х纫?、美托洛爾、氯唑沙宗、奧美拉唑、甲苯磺丁脲和咪達唑侖在肝微粒體中的濃度,各吸收峰分離完全,線性關(guān)系良好,準(zhǔn)確度、精密度及穩(wěn)定性均符合生物樣本檢測要求,操作簡便。
2.低濃度(0.5、1、2、4、8、16μmol·L-1)丹參酮ⅢA對大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4酶活性無顯
5、著性影響(P>0.05),而高濃度(32和96μmol·L-1)丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1酶活性具有抑制作用(P<0.05)。丹參酮ⅡA對大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1的IC50值分別為32.48、34.76、26.12、26.29和26.38μmol·L-1,表示對其具有弱抑制作用。
結(jié)論:
1.本研
6、究建立的大鼠肝微粒體中的“Cocktail”探針?biāo)幬锓ú僮骱啽?,精密度、?zhǔn)確度、靈敏度高,檢測周期短,能夠同時評價藥物在體外對大鼠肝微粒體6種主要CYP450亞型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的影響。
2.丹參酮ⅡA在體外大鼠肝微粒孵育體系中對CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP2E1的代謝活性具有較弱的抑制作用。臨床上通常不易發(fā)生代謝性藥物
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