Cocktail探針藥物法評價鬼針草總黃酮對CYP450酶活性的影響.pdf

1、目的:
　　鬼針草作為我國的傳統(tǒng)中藥材，在肝炎、風(fēng)濕等疾病中有較多應(yīng)用，通過現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，鬼針草具有抗纖維化、抗炎以及抗氧化等方面的藥理活性，而黃酮類被證實是其主要的活性部位，從中藥鬼針草中提取獲得的鬼針草總黃酮，臨床應(yīng)用前景廣闊。在作為治療藥物或疾病補充治療時，中藥及其活性成分與其他藥物之間可能會產(chǎn)生相互作用，這些影響正逐漸引起國內(nèi)外醫(yī)藥工作者的關(guān)注。影響了CYP450的酶活性，是這些藥物之間產(chǎn)生相互作用的重要機制之一。本

2、研究旨在通過建立Cocktail探針藥物分析方法，考察探針藥物在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)變化，反應(yīng)CYP450酶各亞型在不同給藥條件下的活性變化，從而研究鬼針草總黃酮對CYP450酶體內(nèi)代謝活性的影響，以期為藥物相互作用研究提供參考，促進臨床合理用藥。
　　方法:
　　選擇CYP450酶中三種重要亞型CYP2E1和CYP2C9以及CYP3A4相應(yīng)的特異性探針藥物氯唑沙宗、甲苯磺丁脲和咪達唑侖，制成Cocktail探針藥物溶液，建

3、立一種能夠同時測定此三種探針藥物血藥濃度的HPLC方法。為了考察TFB給藥對肝臟CYP450酶活性的影響，將大鼠分為五組：空白對照組、鬼針草總黃酮（TFB）常規(guī)劑量組、鬼針草總黃酮（TFB）高劑量組、抑制劑對照組和誘導(dǎo)劑對照組。TFB常規(guī)劑量組大鼠按體重每日給予鬼針草總黃酮80mg·kg-1灌胃，高劑量組給予鬼針草總黃酮240mg·kg-1灌胃，抑制劑對照組大鼠每日給予西咪替丁50mg·kg-1，以腹腔內(nèi)注射的方式給藥，誘導(dǎo)劑對照組大鼠

4、每日給予苯巴比妥50mg·kg-1，以腹腔內(nèi)注射給藥，空白對照組灌胃與鬼針草總黃酮相同給藥體積的NS，連續(xù)給藥七天。第八天各組大鼠分別給予Cocktail探針藥物溶液，采用尾靜脈注射給藥，在給藥前和給藥后的預(yù)定時間點，從眼眶靜脈叢采血，經(jīng)有機溶劑萃取等方法進行樣品處理后，采用高效液相色譜分析方法，對血漿中各探針藥物濃度進行測定，使用WinNolin2.1軟件按非房室模型，擬合各探針藥物在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)過程。通過比較常規(guī)劑量組、高劑量組

5、與各對照組中探針藥物的藥代動力學(xué)參數(shù)，評價鬼針草總黃酮對肝臟CYP450酶中CYP2E1和CYP2C9以及 CYP3A4此三種重要亞型體內(nèi)代謝活性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.本研究使用HPLC分析方法，同時測定氯唑沙宗、甲苯磺丁脲以及咪達唑侖此三種探針藥物的大鼠血漿藥物濃度，各樣品峰分離完全，3種探針藥物均在0.1~50μg·ml-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系（r=0.9995），低、中、高三個濃度下，3種探針藥物的日內(nèi)精密度

6、RSD在4.22％~6.17%之間，日間精密度RSD在4.38~11.84%之間，回收率在92.71%~109.79%。
　　2.高劑量TFB給藥相對于生理鹽水，使探針藥物氯唑沙宗的AUC0-t、AUC0-∞明顯升高，CL明顯降低（P<0.05），MRT和T1/2有延長但無統(tǒng)計學(xué)差異；使甲苯磺丁脲的AUC0-∞、MRT0-∞及半衰期T1/2明顯升高（P<0.05），但與抑制劑西咪替丁相比，影響程度無統(tǒng)計學(xué)差異；使咪達唑侖AUC0-

7、t明顯增加和CL顯著降低(P<0.05)，T1/2、AUC0-∞、MRT0-∞有輕度升高（P>0.05）。
　　3.常規(guī)劑量TFB給藥使氯唑沙宗的AUC，MRT均有輕度升高，CL輕度降低，但與生理鹽水處理的空白對照組無顯著性差異；使甲苯磺丁脲T1/2和MRT0-∞明顯延長（P<0.05），但與西咪替丁組無統(tǒng)計學(xué)差異；使咪達唑侖的CL明顯降低(P<0.05)，AUC0-t、AUC0-∞輕度增加（P>0.05），但T1/2、MRT0-

8、t和MRT0-∞出現(xiàn)與高劑量組不一致變化。
　　結(jié)論：
　　1.本研究建立Cocktail探針藥物分析方法具有良好的靈敏度、準確度以及精密度，快速、簡便，適用于同時評價藥物對于肝臟CYP450酶中CYP2E1、CYP2C9和CYP3A4這3種重要亞型活性的影響。
　　2.通過大鼠體內(nèi)實驗，初步認為TFB對肝臟CYP450酶有抑制作用，常規(guī)劑量下這種作用不明顯，但三倍常規(guī)劑量的鬼針草總黃酮給藥，對CYP450酶中的CYP