Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu價紅茶和綠茶水提取物對大鼠細(xì)胞色素P450酶的影響.pdf

1、目的:
　　研究綠茶、紅茶水提取物對大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)亞型CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4酶的誘導(dǎo)或抑制作用，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　第一部分:建立LC-MS同時測定非那西丁、安非他酮和咪達(dá)唑侖三種探針?biāo)幯獫{內(nèi)濃度的方法
　　色譜柱:Agilent Zoxbax SB-C18柱;柱溫:30℃;流動相:流動相A（0.1％甲酸溶液）和流動相B（乙腈）;采用梯度洗脫程序:

2、0至1.0分鐘(10-10％B)，1.0至4.0分鐘(10-80％B)，4.0至7.0分鐘(80-80％B)，7.0至9.0分鐘(80-10％B)，9.0至13.0分鐘(10-10％B);流速為0.4 ml//min。質(zhì)譜條件:ESI，正離子檢測，霧化器壓力設(shè)為25psi，毛細(xì)管電壓設(shè)為3500V，干燥氣(N2)流速設(shè)為7L/min，干燥氣溫度設(shè)為350℃。使用SIM測定目標(biāo)離子:非那西丁m/z180，安非他酮m/z240，咪達(dá)唑侖m/

3、z326，卡馬西平（內(nèi)標(biāo)）m/z237。定量方法采用峰面積法?？瞻籽獫{100μ L于1.5mL EP管中，加入含100ng·mL-1卡馬西平的乙腈200μ L，漩渦混勻60秒。接著13000r·min-1離心10min，取上清液200μL于自動進(jìn)樣器的樣品瓶中，設(shè)定5μ L進(jìn)樣檢測。
　　第二部分：運(yùn)用Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu價不同茶水提取物對CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4酶的影響
　　健康雄性SD大鼠18只隨

4、機(jī)分成3組，每組6只，分為紅茶組、綠茶組和對照組。紅茶組大鼠每日早上灌胃給予紅茶水提取物(9％，w/v)9mL·kg-1;綠茶組大鼠每日早上灌胃給予綠茶水提取物(9％，w/v)9mL·kg-1;對照組大鼠每日灌胃給予純水9mL·kg-1，持續(xù)灌胃14天。于第15天早上灌胃給予三種探針?biāo)幬锘旌先芤?非那西丁、安非他酮和咪達(dá)唑侖各10mg·kg-1)。分別于給藥開始前、給藥后0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6

5、、8、10、12h取大鼠尾靜脈血0.3mL處理。液質(zhì)聯(lián)用色譜法分析各點探針?biāo)幍难帩舛?，用藥物與統(tǒng)計軟件Drug AndStatistics version2.0(DAS)分析藥代動力學(xué)參數(shù)，實驗數(shù)據(jù)皆用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差((x)±SD)表示，用Statistical Product and Service Solutions version19.0(SPSS)軟件對各項數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，對照組與紅茶組、對照組與綠茶組之間的比較采用獨

6、立樣本t檢驗，檢驗水準(zhǔn)α為0.05，并繪制藥物濃度-時間曲線圖。
　　結(jié)果:
　　1.血漿樣品經(jīng)LC-MS分析測定得到的色譜圖，三種探針?biāo)幬锱c內(nèi)標(biāo)卡馬西平分離較好。保留時間非那西丁為5.3min，安非他酮為5.0min，咪達(dá)唑侖為5.3min，卡馬西平為3.7min。非那西丁在50-10000ng·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢測限為50ng·ml-1。安非他酮和咪達(dá)唑侖在10-2000ng·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良

7、好，檢測限為10ng· ml-1。低、中、高濃度三種探針?biāo)幬锶諆?nèi)精密度RSD均小于7％，日間精密度RSD均小于9％。低、中、高濃度三種探針?biāo)幬锏南鄬厥章示?3-103％，絕對回收率均大于80％。血漿樣品在室溫放置和冰凍保存的條件下，均有很好的穩(wěn)定性。本方法具有較高的專屬性。
　　2.不同茶水提取物對CYP1A2探針?biāo)幏悄俏鞫≡诖笫篌w內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)的影響:對照組、紅茶組和綠茶組非那西丁血藥濃度曲線下面積AUC(0-t)分別為(17

8、002.17±2986.06)ng·mL-1·h、(14661.42±2663.30)ng·mL-1·h和(14588.26±4837.08)ng·mL1·h，AUC（0-∞）分別為(17988.76±2823.23) ng·mL-1·h、(14991.77±2891.30)ng·mL-1·h和(15242.65±5115.16)ng·mL-1·h;半衰期(t1/2z)分別為(0.85±0.37)h、(0.60±0.24)h和(0.77

9、±0.34)h;清除率(Clz/F)分別為(0.57±0.07) L·h-1·kg-1、(0.69±0.13)L·h-1·kg-1和(0.71±0.20)L·h-1·kg-1;血藥濃度峰值(Cmax)分別為(10089.74±2140.69) ng·mL-1、(9422.61±2077.08) ng·mL-1和(12027.10±2971.63) ng·mL-1。紅茶組、綠茶組分別與對照組的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2z

10、、CLz/F和Cmax比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.不同茶水提取物對CYP2B6探針?biāo)幇卜撬诖笫篌w內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)的影響:對照組、紅茶組和綠茶組安非他酮血藥濃度曲線下面積AUC(0-t)分別為(1858.30±594.16) ng·mL-1·h、(1500.15±360.66) ng·mL-1·h和(1055.07±251.32) ng·mL-1·h,AUC(0-∞)分別為(2007.90±673.98) ng·m

11、L-1·h、(1704.08±479.71) ng·mL-1·h和(1243.71±229.27) ng· mL-1·h;半衰期(t1/2z)分別為(3.33±0.49)h、(5.07±2.48)h和(4.85±1.50)h;清除率(Clz/F)分別為(5.40±1.57) L·h-1·kg-1、(6.25±1.64)L·h-1·kg-1和(8.25±1.36)L·h-1·kg-1;血藥濃度峰值(Cmax)分別為(529.62±128.

12、42) ng·mL-1、(573.08±103.81) ng·mL-1和(322.22±55.47) ng·mL-1。紅茶組與對照組的AUC(0-t)、AUC（0-∞）、t1/2Z、CLz/F和Cmax比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。綠茶組的AUC(0-t)和Cmax顯著低于對照組(P＜0.05)，Clz/F顯著大于對照組(P＜0.05)，AUC(0-∞)和t1/2Z與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4.不同茶水

13、提取物對CYP3A4探針?biāo)庍溥_(dá)唑侖在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)的影響:對照組、紅茶組和綠茶組咪達(dá)唑侖血藥濃度曲線下面積AUC(0-t）分別為(2412.45±794.71)ng· mL-1·h、(1324.04±331.55) ng·mL-1·h和(2199.73±958.37) ng·mL-1·h，AUC(0-∞)分別為(2740.65±1158.38) ng·mL-1·h、(1373.41±337.64)ng·mL-1·h和(2467.63

14、±1152.62) ng·mL-1·h;半衰期(t1/2Z)分別為(1.07±0.62)h、(0.79±0.28)h和(1.12±0.28)h;清除率(Clz/F)分別為(4.23±1.76)L·h-1·kg-1、(7.65±1.86)L·h-1·kg-1和(5.07±2.92)L·h-1·kg-1;血藥濃度峰值(Cmax)分別為(1526.61±677.48) ng·mL-1、(1013.59±270.47) ng·mL-1和(139

15、0.64±324.77) ng·mL-1。紅茶組的AUC(0-t）和AUC（0-∞）顯著低于對照組(P＜0.05)，C1z/F顯著大于對照組(P＜0.05)，t1/2Z和Cmax與對照組比較比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。綠茶組與對照組的AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2Z、CLz/F和Cmax比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.本研究采用的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確可