“Cocktail”探針?biāo)幬锓ㄔu價(jià)辣椒素對大鼠CYP450亞型的影響.pdf

1、評價(jià)辣椒素在體內(nèi)外對大鼠CYP450 亞型CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A4的誘導(dǎo)或抑制作用，為臨床評估和正確處理辛辣食物與藥物間相互作用提供依據(jù)。
　　 本文采用“Cocktail”探針?biāo)幬锓?，研究辣椒素對大鼠CYP450 亞型CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A4 活性的影響，分為體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)兩部分。體外試驗(yàn)中采用非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和睪酮分別作為CYP1A2、CYP2

2、C11、CYP2E1和CYP3A4的探針?biāo)幬?，并建立同時(shí)測定肝微粒體中探針?biāo)幬锛捌浯x產(chǎn)物含量的HPLC分析方法。以固相萃取法提取待測物。采用C18 色譜柱和梯度洗脫進(jìn)行色譜分離，八種待測物在各自線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r≥0.9992），低、中、高三種濃度的日內(nèi)、日間精密度≤10.44％，平均相對回收率均在86.15％~105.56％ 之間，平均提取回收率均在79.86％~88.62％ 之間。結(jié)果表明該方法快速、準(zhǔn)確，可用于肝微粒中探

3、針?biāo)幬锓悄俏鞫?、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、睪酮及其代謝產(chǎn)物的含量測定。
　　 體外孵育試驗(yàn)分為試驗(yàn)組和對照組，試驗(yàn)組采用大鼠肝微粒體孵育體系、探針?biāo)幬锖屠苯匪兀▽φ战M僅加入緩沖液）共同孵育20 min，反應(yīng)終止后用上述HPLC 方法檢測代謝產(chǎn)物的生成量以代表酶的活性，以對照組酶活性為100％，計(jì)算試驗(yàn)組四種亞型相對活性百分比。結(jié)果表明CYP450 四種亞型的相對活性百分比隨辣椒素濃度增加而逐漸降低。采用Graphpad prism

4、5.0 計(jì)算辣椒素對各亞型的IC50 值，評價(jià)辣椒素在體外對四種亞型的抑制作用。結(jié)果顯示辣椒素對大鼠肝微粒體CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和 CYP3A4的IC50 值分別為36.21、17.19、51.64和18.86 μmol·L-1，表明辣椒素在體外可抑制大鼠肝微粒體CYP1A2、CYP2C11和 CYP3A4的活性，對CYP2E1的抑制作用較弱。將辣椒素與大鼠肝微粒體分別預(yù)孵育0、5、10、15、20、30 min，

5、以預(yù)孵育0 min 時(shí)的酶活性為100％，計(jì)算不同預(yù)孵育時(shí)間下各亞型的相對活性百分比，考察辣椒素對CYP450是否為機(jī)理性抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)辣椒素對CYP450未呈現(xiàn)預(yù)孵育時(shí)間依賴性的抑制作用。
　　 依據(jù)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，體內(nèi)試驗(yàn)中選擇CYP1A2、CYP2C11和CYP3A4 三種亞型，分別采用咖啡因、甲苯磺丁脲和氨苯砜作為探針?biāo)幬?，建立同時(shí)測定血漿中三種探針?biāo)幬锖康腍PLC 方法。以液液萃取法提取待測物。采用C18 色譜柱和

6、梯度洗脫進(jìn)行色譜分離，三種待測物在各自線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r≥0.9960），低、中、高三種濃度日內(nèi)、日間精密度≤11.54％，平均相對回收率均在92.84％~108.93％ 之間，平均提取回收率均在67.59％~84.79％ 之間。結(jié)果表明該方法快速、準(zhǔn)確，可用于血漿樣品中探針?biāo)幬锟Х纫?、甲苯磺丁脲和氨苯砜的含量測定。
　　 體內(nèi)試驗(yàn)采用SD 雄性大鼠，分為試驗(yàn)組和對照組，試驗(yàn)組每日清晨按25mg·kg-1的劑量灌胃給予辣

7、椒素溶液；空白組每日清晨按2 mL·kg-1的劑量給予空白溶劑，均連續(xù)給藥7天。給藥期間對大鼠進(jìn)行正常喂養(yǎng)。第7天晨灌胃后30 min，腹腔注射“Cocktail”探針?biāo)幬?，均按?0 mg·kg-1的劑量給藥。于給藥后0.17、0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、12、24 h 斷尾采血，以上述HPLC 法測定血藥濃度。經(jīng)DAS 2.1.1計(jì)算探針?biāo)幬锏乃幋鷦恿W(xué)參數(shù)，通過對比試驗(yàn)組和對照組的藥動學(xué)參數(shù)，評價(jià)辣椒素在體內(nèi)對大鼠CY

8、P1A2、CYP2C11和 CYP3A4的影響。結(jié)果表明辣椒素可顯著縮短咖啡因的T1/2，降低AUC0-t和AUC0-∞，顯著增加其CL，對Cmax和Tmax 無顯著影響；可顯著降低甲苯磺丁脲的AUC0-t和AUC0-∞，顯著增加其CL，對T1/2、Cmax和Tmax 無顯著影響；可顯著降低氨苯砜的AUC0-t和AUC0-∞，顯著增加其CL，對T1/2、Cmax和Tmax 無顯著影響。
　　 綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，辣椒素在體外對大鼠