黃芩對大鼠原代肝細(xì)胞中CYP450 3A1的影響.pdf

1、運(yùn)用大鼠原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)和Western blotting等技術(shù)，探討了傳統(tǒng)中藥黃芩及其單體成分黃芩苷、漢黃芩素等對肝細(xì)胞中CYP450 3A1的影響，旨在探討黃芩體外藥物代謝的分子機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)，以達(dá)到合理用藥、安全用藥的目的。 采用膠原酶二步灌流法獲取大鼠肝細(xì)胞，用不同濃度的黃芩苷、漢黃芩素、黃芩苷-漢黃芩素(1:1)、黃芩粗提物(自制)對肝細(xì)胞進(jìn)行處理， 24h、48h后分別裂解細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)并測定其濃度

2、，用Western blotting法測定肝細(xì)胞中CYP450 3A1含量的變化。用不同濃度的乙醇作用于大鼠肝細(xì)胞，分別在6h、12h、24h收取上清液和細(xì)胞內(nèi)的蛋白，MTT法測細(xì)胞存活率，以上清液中ALT、AST、LDH作為生化指標(biāo)。從上述試驗(yàn)中選出合適的乙醇濃度制備肝損模型，并用黃芩及其單體成分進(jìn)行保肝試驗(yàn)，測定ALT、AST、LDH等指標(biāo)，用Western blotting法測定肝細(xì)胞中CYP450 3A1含量的變化。 膠

3、原酶兩步灌流法獲得了大鼠原代肝細(xì)胞20ml，密度為1-2×10<'7>個/ml，成活率95％左右。黃芩苷、漢黃芩素、黃芩粗提物分別在2、0.05、50 μg/ml時，黃芩苷．漢黃芩素共同作用24h、48h時，蛋白保持在較高水平；隨著黃芩苷、漢黃芩素、黃芩苷-漢黃芩素濃度的增加，各蛋白樣品中CYP450 3A1的含量呈明顯逐漸減少的趨勢，黃芩粗提物也呈減少趨勢但不如單體成分明顯。50mmol/L，乙醇作用12h，肝細(xì)胞ALT、AST、LD

4、H值與陰性對照相比差異均顯著；乙醇作用肝細(xì)胞6h、12h、24h，對CYP4503Al均無明顯影響。黃芩苷與乙醇共同作用肝細(xì)胞，肝細(xì)胞存活率、ALT、AST、LDH與陰性對照相比均呈顯著差異的狀態(tài)；漢黃芩素與乙醇共同作用肝細(xì)胞，在濃度為1.0μg/ml時，ALT、AST、LDH與陰性對照比差異均顯著，但肝細(xì)胞存活率下降明顯；黃芩苷-漢黃芩素與乙醇共同作用肝細(xì)胞，ALT、AST、LDH與陰性對照比差異均顯著，但肝細(xì)胞存活率下降明顯；黃芩粗

5、提物與乙醇共同作用肝細(xì)胞，AST與陰性對照相比差異顯著，在10μg/ml時，ALT、AST、LDH與陰性對照比均差異顯著，肝細(xì)胞存活率下降不明顯。 黃芩苷、漢黃芩素、黃芩粗提物均具有保護(hù)肝細(xì)胞的作用，而黃芩苷的保肝作用尤為明顯，黃芩苷體外作用的最佳濃度為2 μg/ml，漢黃芩素最佳濃度為0.05 μg/ml，但毒性很大，黃芩粗提物最佳濃度為50 μg/ml，黃芩苷．漢黃芩素合用擴(kuò)大了安全濃度使用范圍。黃芩苷、漢黃芩素對大鼠原代肝

6、細(xì)胞中CYP450 3A1具有明顯的抑制作用；黃芩粗提物對CYP450 3A1也有抑制作用，但不如單體成分明顯。乙醇對大鼠原代肝細(xì)胞具有明顯的損傷作用，50mmol/L，最適合做肝損模型。乙醇對大鼠原代肝細(xì)胞中CYP450 3A1無明顯的抑制或誘導(dǎo)作用，既乙醇不依賴于CYP450 3A1來代謝。黃芩苷、黃芩粗提物對乙醇造成的大鼠肝細(xì)胞損傷均具有顯著的保護(hù)作用，但他們的保護(hù)機(jī)制不是通過抑制CYP450 3A1的表達(dá)來完成。漢黃芩素保肝作用