溫腎咳喘片對(duì)CYP450基因表達(dá)的影響及其大鼠體內(nèi)藥物代謝、代謝組學(xué)分析.pdf

1、目的:溫腎咳喘片是由甘草水煎醇沉物、厚樸和蛇床子的超臨界提取物組成的中藥有效部位新藥,具有補(bǔ)脾益氣、化濕止滯、行氣平喘之功效,其主要有效成分有甘草酸、厚樸酚、和厚樸酚、蛇床子素和歐前胡素。CYP450酶系是肝臟中藥物的主要代謝酶,其可誘導(dǎo)或可抑制性是臨床上發(fā)生藥物代謝性相互作用的主要原因,進(jìn)一步將體現(xiàn)在藥物代謝動(dòng)力學(xué)這一環(huán)節(jié)上。據(jù)報(bào)道,厚樸具有腎毒性,其腎毒性有厚樸酚的含量有關(guān),但未深入進(jìn)行研究,且毒性作用機(jī)制不明確,而組方中的甘草具有

2、調(diào)和藥性、解毒等功效,因此,對(duì)溫腎咳喘片主要成分對(duì)CYP450酶系基因表達(dá)的影響及藥物動(dòng)力學(xué)的研究,探索厚樸因其腎毒性和組方解毒作用有關(guān)的生物標(biāo)志物,對(duì)本藥的開(kāi)發(fā)和臨床合理使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:以HepG2細(xì)胞為體外模型,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析了溫腎咳喘片主要成分及甘草中常用成分對(duì)CYP450酶不同基因的影響:選用SD大鼠,分別單次給予甘草酸、厚樸酚、和厚樸酚、蛇床子素、歐前胡素單體和五種成分混合物(3:4:4:3

3、:3),分別采集給藥前和給藥后1、2、4、6、10、24、30、36、48、54、60小時(shí)的血漿,采用UPLC-MS/MS定量檢測(cè)血漿中的藥物濃度,并采用R軟件中的PK程序計(jì)算各成分單獨(dú)用藥與混合使用時(shí)藥代動(dòng)力學(xué)的變化:同時(shí)選用SD大鼠,分為空白組、厚樸組和全方組,分別給予生理鹽水、厚樸超臨界提取物、混合物(甘草水煎醇沉物:厚樸超臨界提取物:蛇床子超臨界提取物=3:4:3),給藥十三天,分別采集給藥前、給藥后第四、七、十、十三天的尿液樣

4、品,采用UPLC-MS/MS對(duì)尿液進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)采集第十三天的血清,測(cè)定反應(yīng)肝、腎功能的生化指標(biāo)(BUN、CRE、GPT、GOT、ALP、TBI),通過(guò)R軟件中的MixOmics、SBBS等程序包進(jìn)行分析,探索厚樸因腎毒性和復(fù)方解毒作用的生物標(biāo)志物。
　　結(jié)果:甘草中的甘草酸、甘草素對(duì)CYP1A2基因的表達(dá)具有誘導(dǎo)作用,甘草苷、甘草混合成分對(duì)CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的表達(dá)具有抑制作用,甘草混合成分能誘導(dǎo)CYP2D6

5、的表達(dá),然而,厚樸酚和歐前胡素均能誘導(dǎo)CYP1A2、2E1、3A4的表達(dá),和厚樸酚和蛇床子素能誘導(dǎo)CYP2E1、3A4的表達(dá)。和厚樸酚大鼠給藥后,主要以硫酸化、葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物代謝,與甘草酸、厚樸酚、和厚樸酚、蛇床子素和歐前胡素單獨(dú)給藥相比,合并使用時(shí),各成分在體內(nèi)的持續(xù)時(shí)間、半衰期、藥時(shí)曲線下面積,達(dá)峰時(shí)間均有所延長(zhǎng),且藥物的濃度波動(dòng)也比較小。厚樸提取物單用時(shí)對(duì)雄性、雌性大鼠均具有腎毒性,產(chǎn)生腎毒性分別與磷酰膽堿、犬尿烯酸、2.8

6、-二羥基嘌呤、二十二碳烯酸和磷酰膽堿、2-羥基戊二酸、2-甲氧基雌酮、四氫皮質(zhì)酮、407.2785,815.5809,461.1833內(nèi)源性生物標(biāo)志物有著較強(qiáng)的相關(guān)性;而當(dāng)厚樸與蛇床子、甘草配伍后的復(fù)方對(duì)腎臟均不會(huì)產(chǎn)生毒性,對(duì)雄性大鼠而言,這種變化與磺基酸和同型半胱氨酸內(nèi)源性生物標(biāo)志物有關(guān)。而厚樸組與復(fù)方組比較,主要差異性物質(zhì)分別為磷酰膽堿、二十二碳烯酸、黃尿酸、同型半胱氨酸、磺基酸、2-酮戊二酸、P甲酚硫酸、3-hydroxytetr

7、adecanedionic acid,453.3484、325.0375內(nèi)源性生物標(biāo)志物有關(guān),而相對(duì)雌性大鼠來(lái)說(shuō),并不存在著差異性。
　　結(jié)論:溫腎咳喘片主要成分對(duì)CYP1A2、2D6、2E1、3A4的表達(dá)有著不同程度的影響,這表明溫腎咳喘片與經(jīng)CYP1A2、2D6、2E1、3A4代謝的藥物合用時(shí)存在著藥物間的相互作用,要注意合理用藥。藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明,甘草、厚樸、蛇床子配伍使用時(shí),能延長(zhǎng)個(gè)有效成分的藥效時(shí)間,說(shuō)明溫腎咳