Cocktail探針藥物法評價大黃素對大鼠CYP2C9和CYP2C19酶的影響.pdf

1、目的:
　　研究大黃素對大鼠細胞色素P450(CYP450)亞型CYP2C9、CYP2C19酶的誘導或抑制作用，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　第一部分:建立LC-MS同時測定兩種探針藥物（甲苯磺丁脲和奧美拉唑）在血漿內濃度的方法
　　色譜柱:Agilent Zoxbax SB-C18柱;柱溫:30℃;流動相:流動相A(0.1％甲酸溶液)和流動相B（乙腈）;采用梯度洗脫程序:0至1.5分鐘(10-8

2、5％ B)，1.5至6.0分鐘(85-85％ B)，6.0至7.0分鐘(85-10％ B)，7.0至10.0分鐘(10-10％B);流速為0.4 ml/min。質譜條件:ESI，正離子檢測，霧化器壓力設為20psi，毛細管電壓設為3500V，干燥氣(N2)流速設為6L/min，干燥氣溫度設為350℃。使用SIM測定目標離子:甲苯磺丁脲m/z271，奧美拉唑m/z198，卡馬西平(內標)m/z237。定量方法采用峰面積法?？瞻籽獫{100μ

3、L于1.5mLEP管中，加入20μL甲醇，加入1μg·mL-1的內標工作液10μL，再加入乙腈200μL，漩渦混勻30s，接著15000r·min-1離心10min，取上清液于自動進樣器的樣品瓶中，5μL進樣檢測。
　　第二部分運用Cocktail探針藥物法評價大黃素對CYP2C9、CYP2C19酶的影響
　　健康雄性SD大鼠12只隨機分成2組，每組6只，分為對照組和試驗組。試驗組大鼠每日灌胃給予大黃素50mg·kg-1，持

4、續(xù)7天;對照組大鼠每日灌胃給予玉米油10ml·kg-1，持續(xù)7天。于第8天灌胃給予兩種探針藥物甲苯磺丁脲(CYP2C9)3mg·kg-1、奧美拉唑(CYP2C19)15mg·kg-1。分別于給藥開始前、給藥后0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12、24h采集尾靜脈血0.3ml。液質聯(lián)用色譜法分析各點探針藥血藥濃度，用藥物與統(tǒng)計軟件Drug And Statisticsversion2.0(DAS

5、)分析藥代動力學參數(shù)，實驗數(shù)據(jù)皆用平均數(shù)±標準偏差（x±SD）表示，用Statistical Product and Service Solutions version19.0(SPSS)軟件對各項數(shù)據(jù)資料進行統(tǒng)計分析，對照組與實驗組之間的比較采用獨立樣本t檢驗，檢驗水準α為0.05，并繪制藥物濃度—時間曲線。
　　結果:
　　1.探針藥物加內標卡馬西平血漿樣品，經(jīng)LC-MS分析測定得到的色譜圖，兩種探針藥物與內標卡馬西平分

6、離較好。保留時間甲苯磺丁脲為4.6min，奧美拉唑為4.2min，卡馬西平為3.7min。奧美拉唑在5～1000ng/ml濃度范圍內線性關系良好，檢測下限為5ng/ml。甲苯磺丁脲在100～10000ng/ml濃度范圍內線性關系良好，檢測下限為100ng/ml。低、中、高濃度兩種探針藥物幾乎不受基質效應干擾，低、中、高濃度兩種探針藥物日內精密度RSD和日間精密度RSD均小于7％。低、中、高濃度兩種探針藥物的相對回收率均在90～105％，

7、絕對回收率均大于80％。血漿樣品在室溫放置和冰凍保存的條件下，均有很好的穩(wěn)定性。本方法具有較高的專屬性。
　　2.對照組、試驗組甲苯磺丁脲血藥濃度曲線下面積AUC(0-t)分別為(91825.387±12236.976)ng·mL-1·h和（126325.146±13579.534)ng·mL-1·h,AUC(0-∞)分別為(105500.398±10443.67)ng·mL-1·h和（148558.54±22779.076）ng

8、·mL-1·h;半衰期（t1/2z）分別為（8.099±2.483）h和（8.587±2.117）h;達峰時間（Tmax）分別為（3.792±2.542）h和(6.833±2.858)h;清除率(Clz/F)分別為(0.029±0.003) L·h-1·kg-1和(0.021±0.003) L·h-1·kg-1;血藥濃度峰值（Cmax）分別為（6776.485±1061.916）ng·mL-1和(7970.035±1384.337)ng

9、·mL-1。試驗組甲苯磺丁脲的AUC(0-t)和AUC(0-∞)顯著大于對照組(P＜0.05)，Clz/F顯著低于對照組(P＜0.05)，兩組t1/2z、Tmax、Cmax比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　對照組、試驗組奧美拉唑血藥濃度曲線下面積AUC(0-t)分別為(520.109±166.714)ng·mL-1·h和（549.472±225.291）ng·mL-1·h，AUC(0-∞)分別為（537.463±164.90

10、6）ng·mL-1·h和(582.055±221.533)ng·mL-1·h;半衰期(t1/2z)分別為(1.891±0.512)h和(1.791±0.431)h;達峰時間（Tmax）分別為（0.222±0.068）h和（0.183±0.091）h;清除率(Clz/F)分別為(30.289±9.575) L·h-1·kg-1和(28.650±9.587) L·h-1·kg-1;血藥濃度峰值（Cmax）分別為（762.124±180.42