基于CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4、ABCB1基因多態(tài)性的伏立康唑個(gè)體化用藥研究.pdf

1、背景:
　　背景近幾十年來(lái),侵襲性真菌感染的情況日益嚴(yán)峻,并伴隨著較高的病死率,是院內(nèi)感染的重要死亡原因之一。目前抗真菌藥物仍是控制侵襲性真菌感染的主要手段;伏立康唑作為第二代三唑類(lèi)抗真菌藥,具有更強(qiáng)的靶點(diǎn)親和力和抗真菌活性,已被多個(gè)指南推薦為治療侵襲性曲霉菌感染的一線治療藥物。伏立康唑主要由肝臟CYP450酶系代謝,CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9系其主要代謝酶,ABCB1是體內(nèi)主要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,且CYP2C19、CYP

2、3A4、CYP2C9、ABCB1存在的基因多態(tài)性能夠不同程度的影響酶代謝或轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性;穩(wěn)態(tài)谷濃度是伏立康唑體內(nèi)暴露劑量的評(píng)價(jià)指標(biāo),與治療效果及不良反應(yīng)密切相關(guān);目前在伏立康唑的臨床抗真菌治療中仍存在著一些問(wèn)題:1.伏立康唑治療窗窄;2.伏立康唑個(gè)體差異顯著;3.伏立康唑有較嚴(yán)重的不良反應(yīng);4.伏立康唑治療費(fèi)用高。伏立康唑的臨床治療受多種遺傳因素及非遺傳因素的影響,截止現(xiàn)在,尚不能完全解釋伏立康唑個(gè)體差異的原因。當(dāng)前亟需解決的就是探究伏

3、立康唑顯著個(gè)體差異的影響因素,從而實(shí)現(xiàn)伏立康唑的個(gè)體化用藥。
　　目的:
　　1、監(jiān)測(cè)中國(guó)漢族血液病患者伏立康唑血清初始穩(wěn)態(tài)谷濃度[(Css)min],探討伏立康唑藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn);2、通過(guò)對(duì)中國(guó)漢族血液病患者CYP2C19,CYP3A4,CYP2C9以及ABCB1基因多態(tài)性的檢測(cè),初步了解河南省人民醫(yī)院中國(guó)漢族血液病患者伏立康唑代謝酶及及ABCB1基因多態(tài)性的分布特點(diǎn);3、探討CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9等主要

4、代謝酶以及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCB1的基因多態(tài)性對(duì)河南省人民醫(yī)院中國(guó)漢族血液病患者(Css)min的影響;4、探討河南省人民醫(yī)院中國(guó)漢族血液病患者臨床非遺傳因素對(duì)(Css)min的影響。
　　方法:
　　1、篩選于2015年3月至2016年9月收住河南省人民醫(yī)院,符合2013年《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌病的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則》血液病侵襲性真菌病的診斷標(biāo)準(zhǔn),使用伏立康唑治療或預(yù)防真菌感染并接受伏立康唑血藥濃度監(jiān)測(cè)的中國(guó)漢族血液病

5、患者進(jìn)行回顧性研究;2、采用高效液相色譜法(HPLC)監(jiān)測(cè)伏立康唑血清谷濃度,通過(guò)全血DNA提取試劑盒提取DNA,紫外/可見(jiàn)光分光光度計(jì)對(duì)提取DNA進(jìn)行濃度和質(zhì)量的檢測(cè),并將DNA樣本保存于-40℃冰箱中;3、采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)技術(shù)對(duì)21個(gè)CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9、ABCB1等的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNPs)進(jìn)行基因分型。PCR引物和單堿基延伸引物由Assay Design

6、er軟件包設(shè)計(jì),檢測(cè)過(guò)程采用Mass ARRAY系統(tǒng)完成。最終結(jié)果由Mass ARRAY RT軟件系統(tǒng)實(shí)時(shí)讀取,Mass ARRAY Typer軟件系統(tǒng)完成基因分型;4、檢索河南省人民醫(yī)院電子病歷系統(tǒng),記錄入選患者人口統(tǒng)計(jì)學(xué)資料、伏立康唑用藥途徑、基礎(chǔ)疾病、合并用藥、實(shí)驗(yàn)室檢查以及SNPs分型結(jié)果和(Css)min等數(shù)據(jù)建立數(shù)據(jù)庫(kù);5、采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用χ~2檢驗(yàn)對(duì)研究中21個(gè)位點(diǎn)的基因分型結(jié)果進(jìn)行

7、Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn);采用SHEsis在線軟件平臺(tái)進(jìn)行連鎖不平衡分析。單因素分析采用非參數(shù)檢驗(yàn)(兩組之間采用Mann-Whitney U檢驗(yàn),三組間采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)),定量數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn);最優(yōu)尺度回歸用于確定導(dǎo)致(Css)min變異性的影響因素,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、本研究共納入86名中國(guó)漢族血液病患者，106例次(Css)min，

8、其中確診侵襲性真菌病（Proven IFD）3例，臨床診斷侵襲性真菌病（Probable IFD）11例，擬診斷侵襲性真菌病（ Possible IFD）32例以及未確定侵襲性真菌?。║ndetermined IFD）40例；(Css)min變異系數(shù)達(dá)65.8％。
　　2、本研究中21個(gè)SNPs的次等位基因頻率（Minor allele frequency，MAF）與全球MAF存在一定程度的差異性，其中rs17882687、rs1

9、2248560、rs1799853、rs2740574、rs35599367、rs10264272和rs41303343次等位基因頻率（Minor allele frequency，MAF）非常低或?yàn)?；
　　3、CYP2C19基因多態(tài)性是(Css)min變異性的重要影響因素，其中相對(duì)于快代謝型患者，(Css)min/D在存在rs4244285或rs4986893突變的（中間代謝型或慢代謝型）患者中更高，同時(shí)(Css)min/D與

10、年齡呈正相關(guān)；
　　4、在中間代謝型或慢代謝型患者中，年齡及rs4646437（CYP3A4）基因型是造成(Css)min/D個(gè)體間差異的影響因素；其中rs4646437的突變（CT或TT）及高年齡與較高的(Css)min/D具有相關(guān)性；在快代謝型患者中，BMI與(Css)min/D呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、伏立康唑個(gè)體差異較大，(Css)min變異性顯著；
　　2、CYP2C19基因多態(tài)性是導(dǎo)致(Css)