四種水產(chǎn)藥物對牙鲆(Paralichthys olivaceus)肝細(xì)胞色素P450酶影響的研究.pdf

1、細(xì)胞色素P450酶（CYP450）是與動(dòng)物體內(nèi)藥物代謝關(guān)系最為密切的藥物代謝酶，其活性的誘導(dǎo)和抑制往往會(huì)導(dǎo)致藥物的相互作用，從而可能產(chǎn)生水產(chǎn)藥物殘留或影響藥物療效，嚴(yán)重威脅水產(chǎn)品安全。然而，關(guān)于水產(chǎn)藥物對魚類CYP450活性誘導(dǎo)和抑制的報(bào)道卻非常少。本文以此為切入點(diǎn)，以重要的近海養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類牙鲆為研究對象，在不同水平上研究了水產(chǎn)用藥物對該酶的活性及表達(dá)的影響。 研究分為兩部分： 第一部分：研究了三種水產(chǎn)用喹諾酮類藥物（F

2、Q）氟甲喹、恩諾沙星和諾氟沙星對牙鲆肝組織中氨基比林N-脫甲基酶（APND）、紅霉素N-脫甲基酶（ERND）和7-乙氧基異吩噁唑酮-脫乙基酶（EROD）活性的影響；以及利用半定量PCR方法研究了上述三種藥物對CYP1A基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，和對照組相比，三種喹諾酮類藥物對牙鲆肝S9中APND、ERND、EROD酶活性均具有抑制作用，其中恩諾沙星和諾氟沙星組3種酶的活性極顯著下降（P<0.01），而氟甲喹組中，APND、ERND酶活性

3、顯著下降（P<0.05），EROD酶活性極顯著下降（P<0.01）。提示這3種FQ藥物牙鲆CYP450酶具有廣泛的不同程度的抑制作用。RT-PCR結(jié)果表明，各藥物組的CYP1A在mRNA水平上發(fā)生了下調(diào)，且3種藥物影響表達(dá)下調(diào)的大小為，恩諾沙星>諾氟沙星>氟甲喹，結(jié)合藥物對CYP1A依賴的EROD酶活性抑制的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)3種不同喹諾酮類藥物對CYP1A酶活性及CYP1A基因表達(dá)的影響具有基本一致的效果，表明這3種藥物作為抑制劑對CYP1A

4、的抑制機(jī)制可能是抑制酶蛋白的合成，即可能是通過抑制CYP1A的表達(dá)，從而減少蛋白質(zhì)翻譯，抑制了CYP1A酶蛋白合成，導(dǎo)致CYP1A酶活性下降。 第二部分：以中藥黃芩苷作為受試藥物，研究其在不同劑量和作用時(shí)間下對牙鲆肝CYP450酶活性及CYP1A基因表達(dá)的影響。采用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，將黃芩苷分別按低（50mg/kg·d）、中（100mg/kg·d）和高（200mg/kg·d）三個(gè)劑量連續(xù)口灌牙鲆，并于給藥3、6、9天后取樣。酶活性結(jié)果表

5、明：給藥3天，較空白組而言，黃芩苷各劑量組的APND、ERND、EROD酶活性沒有明顯變化；給藥6天，高中劑量組的APND、EROD酶活性極顯著增（P<0.01），ERND酶活性顯著下降（P<0.05），中劑量組的APND酶活性極顯著增加（P<0.01），EROD酶活性顯著增加（P<0.05）；給藥9天，高劑量組的APND、EROD酶活性極顯著增加，ERND酶活性極顯著下降（P<0.01），中劑量組的APND、EROD酶活性極顯著增加（

6、P<0.01），ERND酶活性顯著下降（P<0.05），低劑量組的APND、EROD酶活性顯著增加（P<0.05）。由結(jié)果可以看出，黃芩苷對牙鲆肝CYP450酶的作用具有選擇性，即選擇性的誘導(dǎo)CYP1A和CYP2B各自依賴的標(biāo)志酶EROD酶和APND的酶的活性，抑制CYP3A依賴的標(biāo)志酶ERND的活性；黃芩苷對CYP1A的誘導(dǎo)作用與給藥劑量和藥物作用時(shí)間呈相關(guān)性，給藥劑量越高，誘導(dǎo)作用越強(qiáng)，給藥時(shí)間越長，誘導(dǎo)作用也越強(qiáng)。半定量PCR鮚果