鯽魚(yú)肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系的初步研究.pdf

1、細(xì)胞色素P450是一組含鐵血紅素同功酶超家族，參與眾多臨床藥物的代謝。P450的知識(shí)是藥物開(kāi)發(fā)和臨床使用的基本知識(shí)，美國(guó)FDA要求新藥申報(bào)時(shí)提供有關(guān)對(duì)P450影響的資料(包括參與代謝的P450酶和對(duì)P450亞型的誘導(dǎo)、抑制作用等)。目前有關(guān)食品動(dòng)物CYP450酶系報(bào)道很少，尚未見(jiàn)有關(guān)于鯽魚(yú)肝臟藥物代謝酶的研究報(bào)道。本課題對(duì)鯽魚(yú)肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系進(jìn)行了初步研究，以期為魚(yú)類P450的進(jìn)一步深入研究和指導(dǎo)水產(chǎn)藥物的臨床合理應(yīng)用提供理

2、論基礎(chǔ)。 1 鯽魚(yú)肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系檢測(cè)方法學(xué)研究 為建立鯽魚(yú)肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系含量與活性測(cè)定方法，取10尾鯽魚(yú)，應(yīng)用差速離心法提取鯽魚(yú)肝微粒體，Lowry法測(cè)定肝微粒體蛋白濃度，紫外分光光度法測(cè)定肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系含量與活性。結(jié)果顯示鯽魚(yú)肝微粒體蛋白含量為5.238±0.97mg／g肝重，細(xì)胞色素P450含量為0.319±0.032 nmol／mg蛋白，NADPH-細(xì)胞色素C還原酶活性為2

3、.145±0.181 nmol／min／mg蛋白，氨基比林N-脫基酶活性為1.775±0.084 nmol／min／mg蛋白，紅霉素N-脫甲基酶活性為0.906±0.073nmol／min／mg蛋白，苯胺羥化酶活性為0.063+0.007 nmol／min／mg蛋白。提示本文建立的鯽魚(yú)肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系的檢測(cè)方法靈敏可靠，重復(fù)性較好。 2 幾種藥物對(duì)鯽魚(yú)肝微粒體細(xì)胞色素P450酶系的影響 在肝微粒體水平上，研究

4、了苯巴比妥、地塞米松、恩諾沙星及沙拉沙星等幾種藥物對(duì)鯽魚(yú)細(xì)胞色素P450酶系的影響。苯巴比妥按40mg／kg體重、地塞米松按2mg／kg體重給鯽魚(yú)腹腔注射，1次／d×4d；恩諾沙星和沙拉沙星均以100mg／kg體重劑量口灌給藥，1次／d×5d，各組于末次給藥后24h殺魚(yú)取肝作進(jìn)一步試驗(yàn)。結(jié)果表明：經(jīng)苯巴比妥處理的鯽魚(yú)微粒體蛋白濃度、細(xì)胞色素P450含量以及NADPH-Cyt C還原酶、氨基比林-N-脫甲基酶、紅霉素-N-脫甲基酶和苯胺羥

5、化酶等4種酶的活性和對(duì)照組比較均無(wú)顯著差異(P>0.05)；地塞米松處理組的CYP450含量和ERND活性稍有增加，但所有各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與對(duì)照組相比差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；和對(duì)照組比較，恩諾沙星和沙拉沙星組CYP450含量顯著降低(P<0.05)，4種酶的活性極顯著下降(P<0.01)。提示苯巴比妥和地塞米松對(duì)鯽魚(yú)CYP450酶系無(wú)影響，而恩諾沙星和沙拉沙星則對(duì)鯽魚(yú)肝藥酶具有廣泛的抑制作用，水產(chǎn)臨床使用這兩種藥物時(shí)應(yīng)考慮到它們

6、對(duì)P450酶的抑制作用。 用以氯唑沙宗為底物探針的藥動(dòng)學(xué)方法研究氟苯尼考和乙醇對(duì)鯽魚(yú)細(xì)胞色素P450 2El活性的影響，為臨床合理用藥提供參考。將鯽魚(yú)隨機(jī)分為3組，即對(duì)照組、氟苯尼考組和乙醇組。實(shí)驗(yàn)組鯽魚(yú)分別每日經(jīng)口給予氟苯尼考100Mg/kg·bw和乙醇1g/Kg·bw，連續(xù)5天后，與對(duì)照組鯽魚(yú)同時(shí)一次性腹腔注射氯唑沙宗10mg/kg·bw，用高效液相色譜法分別測(cè)定氯唑沙宗在三組鯽魚(yú)體內(nèi)代謝過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，并計(jì)算藥