恩諾沙星與洛克沙胂對(duì)豬與兔肝微粒體細(xì)胞色素P450酶蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、細(xì)胞色素 P450（Cytochrome P450，CYP450，P450）是一類參與機(jī)體內(nèi)、外源化合物代謝的血紅蛋白酶類。CYP450在藥物代謝中起著非常重要的作用，同時(shí)很多藥物能夠?qū)?CYP450產(chǎn)生影響，起誘導(dǎo)或抑制作用，從而影響自身或其他類似藥物的代謝。CYP450在維持動(dòng)物機(jī)體的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，揭示藥物代謝機(jī)理與藥物之間相互作用，以及指導(dǎo)臨床合理用藥等方面都有著非常重要的意義。
　　恩諾沙星是動(dòng)物專用的第三代氟喹諾酮類抗生素

2、。因其抗菌能力強(qiáng)、抗菌譜廣而廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床與畜牧業(yè)生產(chǎn)中。洛克沙胂為有機(jī)砷制劑，用于防治畜禽的細(xì)菌感染，并有促生長(zhǎng)作用。這兩種藥物在很多情況下會(huì)聯(lián)合使用，因此研究?jī)烧咭约皟烧叩穆?lián)合用藥對(duì)CYP450的影響具有重要的實(shí)際意義。豬、兔既是人重要的肉食來(lái)源，也用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，因此本研究具有重要意義。
　　本論文以豬和兔作為對(duì)象，分別從體外和體內(nèi)兩方面研究恩諾沙星（EF）、洛克沙胂（ROX），以及二者的聯(lián)合使用對(duì)豬和兔的肝微粒CYP45

3、0酶系蛋白表達(dá)的影響。
　　EF、ROX單用體外試驗(yàn)方法：將不同濃度的EF和ROX分別添加到豬和兔的肝微粒體體外孵育體系中，并設(shè)對(duì)照組，置于37℃水浴中1 h。采用Western Blotting檢測(cè)肝微粒體中CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1的蛋白表達(dá)。EF和ROX聯(lián)合用藥體外試驗(yàn)方法：將含有EF和ROX各5 mmol·L-1的體外孵育體系于37℃水浴中1 h，以Western Blotting檢測(cè)CYP3A4、CYP1A

4、2、CYP2E1的蛋白表達(dá)。
　　EF、ROX單用以及兩者聯(lián)合用藥的體內(nèi)試驗(yàn)方法：肌肉注射EF5 mg·kg-1·BW-1，飼喂含ROX50 mg·t-1的飼料。EF組的豬和兔分別注射EF；ROX組飼喂僅含ROX的飼料；聯(lián)合用藥組則是既注射EF，同時(shí)飼喂 ROX的飼料；同時(shí)設(shè)對(duì)照組。提取肝微粒體，以 Western Blotting檢測(cè)CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1蛋白表達(dá)。
　　豬體外 EF和ROX單用結(jié)果表明，

5、低、中、高濃度的EF對(duì)CYP3A4酶蛋白表達(dá)有顯著抑制作用（P<0.01）；而低濃度 ROX對(duì)CYP3A4酶蛋白表達(dá)無(wú)顯著性影響（P>0.05），中、高濃度的ROX則對(duì)其有明顯抑制作用（P<0.01）。低、中濃度的EF和ROX對(duì)CYP1A2酶蛋白表達(dá)均無(wú)顯著性作用（P>0.05），高濃度則是抑制作用（P<0.01）。低、中濃度對(duì) CYP2E1酶的蛋白表達(dá)沒(méi)有影響（P>0.05），而高濃度EF則對(duì)其有明顯抑制作用（P<0.01）；低濃度

6、ROX對(duì) CYP2E1酶的蛋白表達(dá)無(wú)影響（P>0.05）；中、高濃度則有明顯抑制作用（P<0.01）。
　　兔體外 EF和ROX單用結(jié)果表明，低、中濃度 EF對(duì) CYP3A4酶蛋白表達(dá)沒(méi)有顯著的影響（P>0.05），高濃度是明顯抑制作用（P<0.01）；低濃度 ROX對(duì) CYP3A4酶蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異（P>0.05），而中、高濃度 ROX則有明顯的抑制作用（P<0.01）。低、中濃度 EF對(duì)于兔CYP1A2蛋白表達(dá)均沒(méi)有顯著作用

7、（P>0.05）；高濃度則有明顯抑制作用（P<0.01）。低濃度ROX對(duì)兔CYP1A2蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異（P>0.05）；中、高濃度則是抑制作用（P<0.01）。低濃度的EF和ROX對(duì)CYP2E1酶蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異（P>0.05），而中、高濃度 EF和ROX對(duì)CYP2E1酶蛋白表達(dá)有明顯抑制作用（P<0.01）。
　　EF和ROX的體外聯(lián)合用藥與對(duì)照組相比對(duì)豬和兔肝微粒體的CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1酶的蛋白表達(dá)均有

8、顯著性抑制作用（P<0.01）。并且與 EF和ROX單獨(dú)用藥組相比均有極顯著的抑制作用（P<0.01）。
　　豬體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示，EF對(duì)CYP3A4和CYP2E1酶的蛋白表達(dá)具有抑制作用（P<0.01），對(duì)CYP1A2則具有誘導(dǎo)作用（P<0.01）；ROX則對(duì) CYP3A4差異不顯著（P>0.05），但能誘導(dǎo) CYP1A2和CYP2E1蛋白表達(dá)（P<0.01）。
　　兔體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示，EF能顯著誘導(dǎo) CYP3A4的蛋白表達(dá)

9、（P<0.01），抑制CYP1A2的表達(dá)（P<0.01），但對(duì)CYP2E1差異不顯著（P>0.05）。ROX能誘導(dǎo) CYP3A4和CYP2E1的蛋白表達(dá)，但對(duì)CYP1A2則是抑制作用（P<0.01）。
　　在體內(nèi)試驗(yàn)中，EF和ROX聯(lián)合用藥對(duì)豬和兔的CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1的蛋白表達(dá)較對(duì)照組均有極顯著抑制作用（P<0.01）。并且對(duì)CYP3A4、CYP2E1的抑制效應(yīng)與EF和ROX單用藥相比，也有極顯著抑制作用。對(duì)