恩諾沙星在蚯蚓體內(nèi)的吸收、分布及對(duì)細(xì)胞色素P450的影響研究.pdf

1、近年來(lái)，環(huán)境保護(hù)與食品安全等已經(jīng)成為人類關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題，其中包含藥品在內(nèi)的個(gè)人生活與護(hù)理用品（PPCPs）對(duì)生態(tài)環(huán)境的污染已逐漸引起人們的重視。藥物殘留對(duì)環(huán)境的污染已成為一個(gè)新興的熱門研究領(lǐng)域。恩諾沙星（Enrofloxacin，EF）是使用最為廣泛的獸藥之一，對(duì)于各種常見(jiàn)病原性革蘭氏陽(yáng)性以及陰性菌有著良好的抗菌作用。在水產(chǎn)和畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中被普遍應(yīng)用，以增強(qiáng)動(dòng)物健康、促進(jìn)生產(chǎn)。由于該藥的大量使用，導(dǎo)致了藥物及其代謝產(chǎn)物隨著畜禽的排泄物釋

2、放到環(huán)境中。這些藥物殘留及其代謝產(chǎn)物可能在土壤中蓄積，對(duì)生態(tài)環(huán)境造成污染。蚯蚓作為分布廣泛的大型土壤動(dòng)物，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)起著不可替代的作用，可作為預(yù)測(cè)化學(xué)物對(duì)土壤環(huán)境以及其他土壤無(wú)脊椎動(dòng)物影響的良好指示生物。本文主要研究EF在蚯蚓體內(nèi)殘留的檢測(cè)方法，蚯蚓機(jī)體對(duì)EF的吸收、分布規(guī)律，以及EF對(duì)兩種典型CYP450亞酶蛋白表達(dá)的影響。
　　首先研究并建立了通過(guò)HLPC-FLD測(cè)定蚯蚓體內(nèi)EF殘留量的方法。樣品預(yù)處理方法為：將0.1 mol

3、·L-1H3PO4溶液(pH12)+乙腈(1+3 v/v)作為提取液，經(jīng)過(guò)提取、脫脂，濃縮，再溶解等步驟。液相色譜條件：FLD，發(fā)射波長(zhǎng)為450 nm，激發(fā)波長(zhǎng)為280 nm。流動(dòng)相：0.025 mol·L-1磷酸/三乙胺緩沖液(pH3.0)+乙腈(83+17v/v)。EF的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為5～500 ng·ml-1，對(duì)其進(jìn)行3種濃度回收率測(cè)定，所測(cè)得回收率范圍為81%～88%，平均回收率為84.5%；變異系數(shù)10%以內(nèi)；保留時(shí)間為11～

4、12min；最低檢出限為2 ng·mL-1。
　　然后研究了兩種標(biāo)準(zhǔn)蚯蚓生態(tài)毒理實(shí)驗(yàn)方法，濾紙接觸試驗(yàn)和自然土壤試驗(yàn)中蚯蚓機(jī)體對(duì)EF的吸收規(guī)律。在濾紙接觸試驗(yàn)中，以EF溶液進(jìn)行濾紙染毒，使其濃度分別為：0.16、1.6、16、32μg·cm-2。48 h后檢測(cè)各個(gè)濃度下蚯蚓體內(nèi)EF的平均含量分別為1.53、16.81、113.32、120.83μg·g-1。自然土壤試驗(yàn)中EF的染毒濃度分別為1、10、100、500 mg·kg-1

5、。將赤子愛(ài)勝蚓放入其中養(yǎng)殖，于1、3、7、21、28d后進(jìn)行取樣，測(cè)定蚯蚓體內(nèi) EF的含量。結(jié)果顯示，1～7d蚯蚓體內(nèi)EF的含量主要呈上升趨勢(shì)，7d后基本達(dá)到峰值。1、10、100、500 mg·kg-1濃度組蚯蚓體內(nèi)EF的含量峰值分別為0.247、0.591、2.798和16.098 mg·kg-1。當(dāng)吸收達(dá)到峰值后，曲線短時(shí)期呈現(xiàn)一定的下降情況，但4個(gè)濃度組分別在21~28d、14~28d、21~28d、14~28d，蚯蚓體內(nèi)EF含

6、量達(dá)到基本平衡。此時(shí)，各濃度組的EF平均含量分別為0.220、0.577、3.486、13.971 mg·kg-1?？梢?jiàn)，蚯蚓通過(guò)體表及消化道對(duì)EF有著良好的吸收。蚯蚓體內(nèi)EF的含量會(huì)隨時(shí)間的延長(zhǎng)以及外界EF濃度的升高而增加，但最終將趨于平衡。同時(shí)，達(dá)到平衡時(shí)各處理組蚯蚓體內(nèi)EF的濃度分別都遠(yuǎn)低于土壤中EF的濃度，4個(gè)濃度組的富集系數(shù)分別為0.220、0.058、0.025、0.028。可見(jiàn)，蚯蚓對(duì)EF有吸收但無(wú)富集效應(yīng)。本文還進(jìn)行了E

7、F在蚯蚓機(jī)體中具體分布情況的研究。結(jié)果顯示，當(dāng)蚯蚓對(duì)EF的吸收達(dá)到平衡后，各組織器官中EF的含量從高到低排序?yàn)樯澳遥灸c＞受精囊＞儲(chǔ)精囊＞體壁。在吸收過(guò)程中，各器官中EF的含量達(dá)到峰值后有一定的波動(dòng)，符合上述蚯蚓整體 EF含量的變化趨勢(shì)。
　　CYP450是參與機(jī)體內(nèi)、外源化合物代謝的一族重要的血紅蛋白酶，也是主要的藥物代謝酶。很多藥物能夠?qū)YP450起到抑制或者誘導(dǎo)的作用，由此改變其自身或其他類似藥物的代謝過(guò)程。本文探索了低中高

8、3種濃度下，EF對(duì)蚯蚓體內(nèi)以CYP2B6和CYP2C9兩種亞酶蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示，0、10、100、500 mg·kg-1四個(gè)濃度組的CYP2B6/β-actin分別為1.930、3.120、2.953和2.406；CYP2C9/β-actin分別為2.473、3.891、3.747和3.141。在本文設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，EF對(duì)蚯蚓CYP450主要起到誘導(dǎo)作用，且誘導(dǎo)作用隨EF濃度的升高先增強(qiáng)后減弱。
　　本文的試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一