基于大鼠肝臟微粒體細胞色素P450酶系的甘遂和甘草配伍作用研究.pdf

1、[目的] 研究中藥十八反中甘遂和甘草配伍對動物的影響和對細胞色素P450氧化酶系的誘導、抑制作用。確定影響細胞色素P450氧化酶的亞型，并對其進行定性及定量研究?？赏沂静糠种兴幨朔此幬锵喾吹姆肿訖C制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。 [方法] (1)通過觀察大鼠生存狀態(tài)和肝臟組織病理變化確證甘遂和甘草是否存在相反作用； (2)通過比較雙向凝膠電泳技術和單向凝膠電泳技術分離后的蛋白經生物質譜鑒定的P450蛋白亞

2、型種類，建立分離鑒定大鼠肝臟微粒體細胞色素P450同工酶的方法； (3)通過RT-PCR技術和蛋白質免疫印跡技術對經鑒定的各細胞色素P450同工酶進行半定量研究； (4)采用酶和底物體外孵育的辦法，通過高效液相色譜和核酸蛋白分析儀對其特異性產物的絕對定量來比較各處理組細胞色素P450同工酶的活性，以確定甘遂和甘草配伍對細胞色素P450同工酶的影響。 [結果] (1)經對大鼠生存狀態(tài)和肝臟組織病理變化比較，

3、合用后比單獨使用時生存狀態(tài)變差、肝臟病理損傷加重； (2)用單向凝膠電泳技術分離和生物質譜技術確認了大鼠肝臟微粒體中至少存在10個P450蛋白亞型，并對其中3個有重要臨床意義的同工酶CYP1A2、CYP2E1和CYP3A2進行了研究； (3)經RT-PCR技術和蛋白質免疫印跡技術對CYP1A2、CYP2E1和CYP3A2進行半定量研究，得出甘遂、甘草單用以及合用在物質的含量上對這3種同工酶存在不同的影響； (4)

4、經對CYP1A2、CYP2E1和CYP3A2酶的活性進行統(tǒng)計學分析，確認甘遂、甘草單用以及合用在物質的功能上對這3種同工酶存在不同的影響。 [結論] (1)成功的建立了基于凝膠電泳和生物質譜的P450同工酶的分離和鑒定方法，多于國外2002年發(fā)表的鑒定出3個亞型的結果，為中藥“十八反”中其它藥對基于大鼠肝臟細胞色素P450酶系的研究奠定了基礎； (2)從動物實驗的層面提示甘遂和甘草確實存在相反作用，作用的結果是使

5、藥物的肝臟毒性增強； (3)從CYP1A2、CYP2E1和CYP3A2物質基礎和功能兩個方面提示甘遂和甘草存在基于藥物代謝酶的相反作用； (4)CYP1A2和CYP2E1主要激活前致癌物和前毒物，有文獻報導甘遂中即含有此類成分，且有文獻報導CYP1A2和CYP2E1活性與許多癌癥的發(fā)病相關。研究證實合用組比對照和單用組此兩種酶的含量和活性都有所增加，提示合用后增加了罹患腫瘤的機率； (5)CYP3A2代謝臨床上6