細(xì)胞色素P450酶系在人臍帶血造血干-祖細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、目的:通過(guò)PCR方法系統(tǒng)性檢測(cè)人源57種CYP450(cytochrome P450)基因在CD34(+)人臍帶血造血干/祖細(xì)胞(cord blood hematopoietic stem and early progenitorcells，CBHSPCs)中的表達(dá)，并通過(guò)real time PCR進(jìn)一步檢測(cè)CYP1B1和CYP2R1在總單核細(xì)胞（total mononuclear cells，MNCs）和CD34(+)CBHSPCs中

2、的基因相對(duì)表達(dá)量。
　　方法:使用鼠抗人CD34單抗免疫磁珠，以人IgG作為阻斷劑，通過(guò)免疫磁珠分選方法(magnetic cell sorting，MACS)從人臍帶血中分選純化CD34(+)CBHSPCs。使用熒光素PE標(biāo)記的CD34抗體，以熒光素PE標(biāo)記的鼠IgG2a單抗作為同型對(duì)照，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選到的細(xì)胞群中CD34(+)細(xì)胞的純度。Trizol法提取CD34(+)CBHSPCs中的RNA，用57種CYP450基因

3、的特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析，以篩選出在CD34(+)CBHSPCs中有表達(dá)的CYP450基因。利用real time PCR方法，對(duì)CYP1B1和CYP2R1在MNCs和CD34(+)CBHSPCs中的相對(duì)基因表達(dá)差異進(jìn)行定量分析。所有實(shí)驗(yàn)都至少重復(fù)三次。
　　結(jié)果:PCR結(jié)果顯示，在人源57種CYP450基因中有14種在CD34(+) CBHSPCs中被檢測(cè)到有表達(dá)，這14種CYP450基因分別是C

4、YP1A1，CYP1B1，CYP2E1，CYP2C18, CYP2C19, CYP2J2, CYP2R1, CYP2S1, CYP2U1, CYP4F2, CYP4V2,CYP20A1， CYP27A1和CYP51A1。Real time PCR結(jié)果顯示， CYP2R1在CD34(+)CBHSPCs中呈現(xiàn)高表達(dá)，而CYP1B1在MNCs中的表達(dá)水平明顯高于CD34(+)CBHSPCs中的表達(dá)水平。
　　結(jié)論:本課題首次系統(tǒng)性檢測(cè)所

5、有在人源57種CYP450基因在CD34(+)CBHSPCs中的表達(dá)譜。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示有14種CYP450基因在CD34(+)CBHSPCs中被檢測(cè)到表達(dá)。Real time PCR結(jié)果顯示，CYP2R1在CD34(+)CBHSPCs中的表達(dá)水平明顯高于在MNCs中的表達(dá)水平，而CYP1B1則與之相反。本課題為進(jìn)一步檢測(cè)CYP450基因在CD34(+)CBHSPCs中的生物學(xué)功能奠定理論基礎(chǔ)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示細(xì)胞色素P450氧化酶在其已熟知的