臍帶血造血干-祖細(xì)胞與脂肪干細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)作用距離的研究.pdf

1、造血干/祖細(xì)胞(hemtopoietic stem progenitor cells，HSPCs)在治療貧血等血液疾病、白血病等癌癥病人的造血重建、基因治療和免疫治療等方面有極重要的臨床應(yīng)用價(jià)值，因此多年來(lái)一直得到科研工作者和臨床醫(yī)生的高度重視和關(guān)注。雖然前人對(duì)HSPCs的體外擴(kuò)增已經(jīng)做了大量的實(shí)驗(yàn)研究，但由于培養(yǎng)條件對(duì)HSPCs體外擴(kuò)增的影響非常復(fù)雜，在不同的培養(yǎng)條件下，擴(kuò)增效果差別很大，眾多的影響參數(shù)均需要深入研究。 造血干

2、/祖細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的有效作用距離還是一個(gè)懸而未決的問(wèn)題，為此，本文采用修正的transwell改變臍帶血來(lái)源的造血干/祖細(xì)胞(HSPCs)和人脂肪組織來(lái)源的脂肪干細(xì)胞(adipose derived stem cells，ADSCs)的作用距離，獲得最佳的細(xì)胞共培養(yǎng)距離。采用的方法是在無(wú)菌條件下采集正常足月產(chǎn)婦臍帶血，與PBS緩沖液1:1等體積混合，利用Ficoll分離液(1.077g/ml)密度梯度離心(2500rpm，25m

3、in)收獲單個(gè)核細(xì)胞(mononuclear cells，MNCs)。共培養(yǎng)時(shí)先將ADSCs以2×105cells/ml密度接種到六孔板中，然后將收獲的MNCs以1×108cells/ml密度接種到transwell小室內(nèi)，所用的培養(yǎng)基是添加12.5％胎牛血清FBS和12.5％馬血清HS的IMDM，最后將transwell小室放到調(diào)節(jié)好HSPCs和ADSCs之間的作用距離的六孔板中進(jìn)行7天的共培養(yǎng)。其間每24小時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，觀察細(xì)胞形