臍帶血干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化.pdf

1、目的：本研究通過人臍帶血干細(xì)胞(Umbilicalcordbloodstemcells，UCBSCs)經(jīng)尾靜脈移植到失代償期肝硬化SD大鼠體內(nèi)，采用檢測肝功能、肝纖維化指標(biāo)及病理分級評分等來評價(jià)治療效果，為UCBSCs移植治療失代償期肝硬化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用羥乙基淀粉(Hydroxythy1starch，HES)法從臍帶血中分離出單個(gè)核細(xì)胞(Mononuclearcells，MNCs)，包含臍帶血CD34+造血干細(xì)胞，

2、通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。通過腹腔注射四氯化碳(CarbonTetrachloride，CCl4)加酒精溶液法制備失代償期肝硬化大鼠模型，以病理檢測作為模型成功與否的標(biāo)準(zhǔn)。將模型大鼠隨機(jī)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組10R，經(jīng)檢測兩組各項(xiàng)指標(biāo)之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組從大鼠尾靜脈注射UCBSCs，對照組從大鼠尾靜脈注射DMEM/F-12(Dulbecco’smodifiedEagle’smedium/F-12，DME

3、M/F-12)，術(shù)后兩組大鼠均給予腹腔內(nèi)注射環(huán)磷酰胺2mg/100g，連續(xù)1周。注射后觀察4周，每周分別取血測定肝功能和肝纖維化指標(biāo)，觀察并記錄各組大鼠的生存狀態(tài)及生存時(shí)間。4周后，將所有存活大鼠麻醉、解剖，取肝臟組織，標(biāo)本用100g/L中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，常規(guī)蘇木精-伊紅(Haematoxylinandeosin，HE)和馬松(Masson)染色，檢測大鼠肝細(xì)胞損傷和纖維化情況，并進(jìn)行病理組織分級評分。
　　結(jié)果：

4、1.治療后，每周一次動(dòng)態(tài)檢測，實(shí)驗(yàn)組大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanineaminotransferase，ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartateaminotransferase，AST)的含量逐周下降，兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而白蛋白(Albumin，Alb)升高及總膽紅素(Totalbilirubin，TBil)降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；透明質(zhì)酸(HyaluronicAcid，HA)、層粘連蛋

5、白Laminin，LN、膠原蛋白Ⅳ(CollagentypeⅣ，CⅣ)降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而前膠原蛋白Ⅲ(ProcollagentypeⅢ，PCⅢ)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.肝臟大體標(biāo)本觀察：實(shí)驗(yàn)組肝臟邊緣變鈍，表面紋理增多，局部可見細(xì)小顆粒樣突起，無明顯結(jié)節(jié)形成；對照組大鼠肝臟質(zhì)地較硬，不同程度萎縮變小，顏色灰暗，表面可見大小不等的硬化結(jié)節(jié)。
　　3.治療后肝臟切片HE和Mass

6、on染色顯示：實(shí)驗(yàn)組肝臟呈中度纖維化，假小葉的纖維間隔纖細(xì)，肝細(xì)胞變性及壞死程度較輕，僅見少量脂肪空泡；對照組肝臟標(biāo)本鏡下可見中、重度纖維化，假小葉的纖維間隔粗厚，肝細(xì)胞變性及壞死程度重，可見多量脂肪空泡。組織病理學(xué)評分表明，實(shí)驗(yàn)組較對照組肝細(xì)胞壞死及脂肪變程度減輕，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)，而肝纖維化程度減輕，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.136)。
　　4.治療后實(shí)驗(yàn)組大鼠死亡2只，生存率為80.0％(8/10)，對照組

7、大鼠死亡5只，生存率為50.0％(5/10)，用Kaplan-Meier進(jìn)行生存分析，實(shí)驗(yàn)組的生存率比對照組高，經(jīng)Log-rank法檢驗(yàn)，兩組大鼠生存率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.259)。
　　結(jié)論：1.應(yīng)用HES法可從臍帶血中提取中分離到MNC，含有足量的UCBSCs，數(shù)量達(dá)到治療劑量標(biāo)準(zhǔn)，在免疫標(biāo)志、生物學(xué)特性方面的研究結(jié)果符合造血干細(xì)胞的特征，可作為造血干細(xì)胞的一種細(xì)胞來源。2.采用改良型腹腔注射CCl4法制備慢性肝硬化大鼠