Caveolin-1對OGD-R人臍帶血內(nèi)皮祖細胞中VEGF表達的影響.pdf

1、目的:探討caveolin-1對氧糖剝奪/復(fù)氧(Oxygen glucosedeprivation/reoxygenation，OGD/R)人臍帶血內(nèi)皮祖細胞(endothelialprogenitor cells，EPCs)中VEGF的影響。
　　方法:密度梯度離心法獲得單個核細胞，接種于鼠尾I型膠原包被培養(yǎng)板，用內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)液EGM-2培養(yǎng)，觀察EPCs生長情況，通過觀察細胞生長形態(tài)、雙熒光染色法、免疫熒光細胞化學(xué)染色法和

2、流式細胞儀等對EPCs鑒定;選取EPCs高表達的時間點，構(gòu)建針對caveolin-1基因的RNA干擾真核表達質(zhì)粒，建立基因沉默模型和OGD/R模型，隨機分為正常對照組、OGD/R組、caveolin-1基因沉默組、caveolin-基因沉默OGD/R組，免疫熒光法和Western-Blot法檢測caveolin-1及VEGF的表達。
　　結(jié)果:1.人臍帶血分離培養(yǎng)可獲得內(nèi)皮祖細胞，在培養(yǎng)的10d～21d出現(xiàn)貼壁及典型“鋪路石”樣形

3、態(tài)，雙熒光染色法、免疫熒光細胞化學(xué)染色法及流式細胞儀可成功鑒定EPCs;
　　2.成功構(gòu)建人臍帶血內(nèi)皮祖細胞caveolin-1基因沉默模型，caveolin-1的表達在caveolin-1基因沉默組顯著低于正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;
　　3.Caveolin-1的表達在caveolin-1基因沉默組顯著低于正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;OGD/R組caveolin-1表達明顯高于

4、正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);OGD/R組caveolin-1表達明顯高于caveolin-1基因沉默OGD/R組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;caveolin-1基因沉默組caveolin-1表達量高于caveolin-1因沉默OGD/R組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　4.VEGF的表達在caveolin-1基因沉默組顯著低于正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;OGD/R組

5、VEGF表達明顯高于正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;OGD/R組VEGF表達明顯高于caveolin-基因沉默 OGD/R組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01);caveolin-1因沉默組VEGF表達量高于caveolin-1因沉默OGD/R組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05);
　　5.直線相關(guān)性分析
　　人臍帶血內(nèi)皮祖細胞caveolin-1表達與VEGF表達的關(guān)系:VEGF與caveolin-1表