豬沙門菌恩諾沙星耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、抗生素在臨床上的不合理或不正當(dāng)使用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥問題日益嚴(yán)峻。對(duì)細(xì)菌耐藥性進(jìn)行監(jiān)測(cè)是有效控制耐藥性和指導(dǎo)臨床合理用藥的基礎(chǔ)，而制定耐藥性判定標(biāo)準(zhǔn)是規(guī)范耐藥性監(jiān)測(cè)的必要條件。美國(guó)、歐盟以及日本等發(fā)達(dá)國(guó)家都制定了一系列細(xì)菌耐藥判定和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)主要參考的是美國(guó)CLSI中的標(biāo)準(zhǔn)。然而我國(guó)細(xì)菌耐藥程度與美國(guó)細(xì)菌耐藥程度并不完全一致，故我國(guó)迫切需要制定適合我國(guó)耐藥性情現(xiàn)狀的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)。作為一種重要的人畜共患菌，沙門菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥性在我

2、國(guó)日益突出，然而豬源沙門菌恩諾沙星的耐藥性判定卻無標(biāo)準(zhǔn)可依，因此建立豬源沙門菌恩諾沙星的折點(diǎn)值對(duì)耐藥性監(jiān)測(cè)和臨床用藥具有重要的指導(dǎo)意義。本課題參考美國(guó)CLSI，歐盟EUCAST等標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法方法，建立了豬沙門菌恩諾沙星野生型折點(diǎn)和藥效學(xué)折點(diǎn)。
　　 1、豬沙門菌恩諾沙星的野生型折點(diǎn)值(COwT)
　　 本研究使用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基和PCR方法對(duì)230株豬源病原菌進(jìn)行特異性鑒定。230株豬源病原菌接種到科瑪嘉顯色培養(yǎng)基，挑

3、取紫色菌落，初步鑒定出214株豬源沙門菌，再用特異性基因invA進(jìn)行PCR特異性檢測(cè)，最終確定214株病原菌全為豬源沙門菌。
　　 用非線性回歸法制定野生型折點(diǎn)值。采用CLSI中規(guī)定的瓊脂稀釋法測(cè)定恩諾殺星對(duì)豬源沙門菌的最低抑菌濃度(MIC)。繪制MIC柱狀分布圖，其中野生型菌株的MIC柱狀圖符合以二為底的對(duì)數(shù)正態(tài)分布。用SigmaStat3.5軟件根據(jù)非線性回歸分析方法測(cè)定野生型菌株的MIC對(duì)數(shù)正態(tài)分布數(shù)據(jù)，選擇與實(shí)際測(cè)得的菌

4、株總數(shù)差異最小的MIC分布作為野生型菌株MIC分布。根據(jù)相關(guān)規(guī)定，95%野生型菌株的MIC即為野生型折點(diǎn)值。結(jié)果表明，當(dāng)MIC的取值范圍在0.125-4μg/mL時(shí)，野生型菌株共有183株，與實(shí)際測(cè)得的182株菌只相差一株菌，差異最小。另外31株菌為耐藥性豬沙門氏菌，耐藥率為14.5%。根據(jù)野生型MIC柱狀圖測(cè)得的豬沙門氏菌對(duì)恩諾沙星的野生型折點(diǎn)為≤2μg/mL，包括了100%的野生型豬源沙門氏菌。
　　 2、豬沙門菌恩諾沙星藥

5、效學(xué)折點(diǎn)值(COPPD)
　　 用高效液相法測(cè)定豬血漿中的藥時(shí)數(shù)據(jù)。選取12頭3月齡健康豬，0.5 mL/kg臀部肌肉注射恩諾沙星溶液。取不同時(shí)間點(diǎn)的血漿進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)方法為血漿用乙腈處理后，用反相高效色譜法測(cè)定恩諾沙星的濃度，選擇的流動(dòng)相是10%甲醇，10%乙腈，0.03 M乙酸銨和0.02M檸檬酸。之后，用3p97軟件分析藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)，結(jié)果表明，藥時(shí)數(shù)據(jù)符合一室吸收模型。
　　 只有處于游離狀態(tài)的藥物才具有活性，與蛋白

6、結(jié)合的藥物會(huì)影響到活性藥物濃度，因而本課題用透析法測(cè)定了恩諾沙星在豬血漿中的蛋白結(jié)合率。結(jié)果表明，藥物濃度與血漿蛋白結(jié)合率的關(guān)系較大，200μg/ml-2000μg/ml的蛋白結(jié)合率范圍為41.4%-56.6%。
　　 用Monte Carlo模擬方法制定藥效學(xué)折點(diǎn)值。AUC0-24/MIC是豬沙門菌恩諾沙星藥效學(xué)折點(diǎn)的有效參數(shù)，用Crystal Ball軟件得出不同AUC0-24/MIC與MIC取值的累積百分率。當(dāng)AUC0-2

7、4/MIC為125，相臨兩個(gè)MIC值差異較大時(shí)，取前一個(gè)MIC值作為藥效學(xué)折點(diǎn)值。結(jié)果表明，豬沙門菌恩諾沙星的藥效學(xué)折點(diǎn)為≤1μg/mL。根據(jù)CLSI相關(guān)規(guī)定，當(dāng)缺乏臨床型折點(diǎn)值時(shí)，測(cè)定的藥效學(xué)折點(diǎn)值即為敏感性折點(diǎn)值。所以本研究制定出的豬源沙門氏菌對(duì)恩諾沙星的敏感性折點(diǎn)值為≤1μg/ml。
　　 綜上所述，本課題參考了CLSI中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)方法，制定出了豬沙門菌恩諾沙星的野生型折點(diǎn)和藥效學(xué)折點(diǎn)，并根據(jù)CLSI相關(guān)規(guī)定制定出了豬沙門