殘留劑量恩諾沙星對連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)中腸道菌群的影響.pdf

1、自從抗菌藥物發(fā)明以來，它在現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展中發(fā)揮了無可替代的作用，但同時也給動物性食品帶來藥物殘留，為食品安全和人類健康帶來嚴(yán)重威脅。目前研究發(fā)現(xiàn)人體長期攝入殘留劑量抗菌藥物會對腸道菌群產(chǎn)生不利影響，如破壞腸道菌群定植抗力，誘導(dǎo)及促進(jìn)耐藥菌的增長等。國際組織、歐美等國家已將抗菌藥物殘留對人體腸道菌群的影響列為安全性評價的一項重要內(nèi)容，并制定了框架性文件，成立了專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行抗菌藥物殘留微生物學(xué)安全評價，以此獲得抗菌藥物每日允許攝入量(Ac

2、ceptable daily intake，ADI)。抗菌藥物殘留微生物安全性評價主要分為體內(nèi)模型和體外模型兩種。其中連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)作為體外模型的一種，因具有樣品均勻一致，可長時間、連續(xù)接觸藥品且可保留細(xì)菌樣品的復(fù)雜性、無道德限制等特點，被國際組織如JECFA、VICH、US FDA CVM、WHO/FAO(3)等推薦用于抗生素殘留的安全性評價。 我國已是世界上濫用抗菌藥物最為嚴(yán)重的國家之一，每年約有8萬人死于抗菌藥物濫用；我國細(xì)

3、菌耐藥也已相當(dāng)嚴(yán)重，耐藥的大腸埃希菌、金黃色球菌、肺炎球菌的比例分別高達(dá)50％、60％和70％，更為嚴(yán)重的是，多藥耐藥病原體的出現(xiàn)使臨床治療中抗菌藥物的選擇出現(xiàn)困難。因此，對抗菌藥物微生物安全性評價迫在眉睫。 恩諾沙星屬氟喹諾酮類藥物，具有吸收好，組織濃度高，半衰期長，抗菌譜廣等優(yōu)點，且與其他抗菌藥物無交叉耐藥性，因而被廣泛用于獸醫(yī)臨床。但隨著該類藥物不合理使用和濫用情況的發(fā)生，恩諾沙星的殘留問題逐漸引起人們的重視。恩諾沙星主要

4、通過人類食用動物性食品進(jìn)入人體，導(dǎo)致菌群數(shù)量和代謝產(chǎn)物的變化，增加細(xì)菌的耐藥率，使菌群定植抗力發(fā)生變化。當(dāng)前，雖有關(guān)于恩諾沙星對腸道菌群作用的文獻(xiàn)報道，但利用連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)對抗菌藥干擾后的腸道菌群進(jìn)行長周期，連續(xù)性觀察尚屬首次。本研究中我們建立了四套連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)用于模擬人腸道內(nèi)環(huán)境，將國際規(guī)定的恩諾沙星ADI值2.0 ug/kg/day換算為相當(dāng)于連1續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)的1.25 ug/mL。在此基礎(chǔ)上，設(shè)置了1.25、12.5和125ug/mL

5、三個殘留劑量，觀察不同殘留劑量恩諾沙星對連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)腸道菌群數(shù)量和多樣性的影響。 本研究利用傳統(tǒng)的活菌計數(shù)方法和PCR—DGGE法對連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)的腸道菌群從數(shù)量和多樣性上進(jìn)行了檢測，評估恩諾沙星殘留對腸道菌群的影響。具體研究結(jié)果如下： 1．活菌計數(shù)檢測表明：空白組中，需氧總菌、厭氧總菌、乳酸菌、雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌、擬桿菌菌群數(shù)量穩(wěn)定，表明建立的連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)具有較好的穩(wěn)定性；1.25ug/mL組中，需氧總菌、厭

6、氧總菌、乳酸菌、腸球菌、腸桿菌、擬桿菌菌群數(shù)量變化不大，雙歧桿菌菌群數(shù)量下降；12.5 ug/mL組中，需氧總菌、厭氧總菌、乳酸菌、雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌菌群數(shù)量均發(fā)生變化：需氧總菌、腸球菌數(shù)量下降，厭氧總菌、乳酸菌、腸桿菌數(shù)量先下降后上升，雙歧桿菌數(shù)量下降后不可恢復(fù)，擬桿菌菌群基本無變化；125 ug/mL組中，需氧總菌菌群數(shù)量下降，厭氧總菌、乳酸菌、腸桿菌菌群數(shù)量先下降后上升，雙歧桿菌、腸球菌、擬桿菌菌群數(shù)量下降后不可恢復(fù)。

7、 2．PCR—DGGE檢測表明：空白組DGGE圖譜條帶變化小，說明連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)穩(wěn)定；1.25ug/mL組中，給藥后前3天條帶數(shù)數(shù)目和位置與未加藥期接近，之后條帶數(shù)先減少后增多，停止加藥前，條帶數(shù)與不加藥期接近；12.5ug/mL組中給藥后圖譜條帶數(shù)減少，到第4天，圖譜條帶數(shù)逐漸增加：125ug/mL組中，給藥后條帶數(shù)減少，且在停止加藥前條帶數(shù)目不可恢復(fù)。 文中對連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)中腸道菌群的數(shù)量和多樣性的檢測結(jié)果表明：1.25ug/