過(guò)表達(dá)Tcfec對(duì)造血干細(xì)胞的影響研究.pdf

1、在血液系統(tǒng)中，轉(zhuǎn)錄因子Tcfec主要在造血干細(xì)胞(Hematopoieticstemcells，HSCs)和多能祖細(xì)胞(Multipotentprogenitors,MPPs)中高表達(dá)。目前為止，關(guān)于Tcfec在HSCs的功能影響及機(jī)制尚不清楚。
　　目的：
　　1、證實(shí)Tcfec在HSCs和MPPs中的表達(dá)水平。
　　2、構(gòu)建Tcfec逆轉(zhuǎn)錄病毒過(guò)表達(dá)體系。
　　3、通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究過(guò)表達(dá)Tcfec對(duì)HS

2、Cs的功能影響。
　　方法：
　　1、分選高純度HSCs和MPPs細(xì)胞群，MySeq測(cè)序儀進(jìn)行RNA-Seq測(cè)序并獲得原始測(cè)序數(shù)據(jù)(Rawdata)。利用生物信息學(xué)技術(shù)深入分析，獲得了HSCs及MPPs細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)差異譜。
　　2、q-PCR分析Tcfec在HSCs和MPPs中的表達(dá)水平。
　　3、利用逆轉(zhuǎn)錄病毒過(guò)表達(dá)系統(tǒng)，將小鼠Tcfec基因的開(kāi)放閱讀框（Openreadingframe,ORF）構(gòu)建到過(guò)

3、表達(dá)載體，并用細(xì)胞轉(zhuǎn)染、熒光定量PCR方法驗(yàn)證過(guò)表達(dá)體系的構(gòu)建。
　　4、將流式分選的陽(yáng)性細(xì)胞（感染過(guò)表達(dá)病毒載體的小鼠胎肝Lin-細(xì)胞）移植到經(jīng)致死劑量輻照處理的受體鼠，構(gòu)建體內(nèi)移植動(dòng)物模型。
　　5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)移植細(xì)胞的陽(yáng)性率和對(duì)骨髓造血譜系分化影響的相關(guān)檢測(cè)。
　　6、流式細(xì)胞儀檢測(cè)Tcfec對(duì)HSPC細(xì)胞周期的影響。
　　7、利用體外克隆形成實(shí)驗(yàn)，研究Tcfec對(duì)體外克隆形成的影響效果。
　　結(jié)

4、果：
　　1、Tcfec在HSCs相對(duì)MPPs高表達(dá)。
　　2、成功構(gòu)建Tcfec過(guò)表達(dá)載體。
　　3、移植16周后，Tcfec組中陽(yáng)性細(xì)胞比例占有優(yōu)勢(shì)，血細(xì)胞各譜系分化完全正常。
　　4、過(guò)表達(dá)Tcfec的HSCs及MPPs細(xì)胞庫(kù)總體數(shù)量增加，但對(duì)CMP、GMP、MEP祖細(xì)胞庫(kù)無(wú)影響。
　　5、Tcfec對(duì)于HSPC的細(xì)胞周期沒(méi)有影響。
　　6、Tcfec組體外形成的混合細(xì)胞型克隆（GEMM）較對(duì)照