RPE細(xì)胞對T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能在AMD中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景及目的：年齡相關(guān)性黃斑變性（age-related macular degeneration，AMD）是由多種因素引起黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigmented epithelium，RPE）細(xì)胞和感光細(xì)胞損傷為特征的疾病，其發(fā)病機(jī)理仍不清楚。近年來發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫反應(yīng)是AMD發(fā)病的重要因素。但在AMD發(fā)生時RPE細(xì)胞對T細(xì)胞的免疫功能并不清楚。因此，本課題旨在研究在 AMD危險(xiǎn)因子作用下 RPE細(xì)胞對T細(xì)胞

2、亞群的免疫調(diào)節(jié)功能，從而探索T細(xì)胞免疫在AMD發(fā)生中的作用及機(jī)制。
　　方法：首先，通過分離小鼠原代RPE細(xì)胞或用人ARPE19細(xì)胞系與初始 T細(xì)胞共同培養(yǎng)，并在各 T細(xì)胞亞群分化環(huán)境中共培養(yǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測誘導(dǎo)的T細(xì)胞亞群的表型與功能，研究正常RPE細(xì)胞對T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能。其次，用AMD危險(xiǎn)因子A2E刺激RPE細(xì)胞，在體外模擬AMD發(fā)生時RPE細(xì)胞的氧化損傷，并與T細(xì)胞共培養(yǎng)，通過流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR技術(shù)檢測T細(xì)胞亞群分

3、化狀況，研究AMD危險(xiǎn)因子對RPE細(xì)胞調(diào)控T細(xì)胞功能的影響。最后，通過ELISA和RT-PCR檢測A2E刺激后RPE細(xì)胞的免疫狀態(tài)，并通過中和IL-1β或抑制COX2-PGE2通路分析介導(dǎo)A2E損傷RPE細(xì)胞對T細(xì)胞調(diào)節(jié)功能的因素和信號通路。
　　結(jié)果：首先，正常 RPE細(xì)胞能誘導(dǎo) T細(xì)胞分化為具有免疫調(diào)節(jié)功能Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，并能抑制初始T細(xì)胞分化為Th1、Th2、Th17等效應(yīng)性T細(xì)胞亞群。其次，A2E抑制RPE細(xì)胞誘

4、導(dǎo)Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能，并且A2E可特異性損傷RPE細(xì)胞對Th1細(xì)胞分化的免疫抑制功能，卻并不影響RPE細(xì)胞對Th2和Th17細(xì)胞的抑制功能。最后，我們發(fā)現(xiàn)A2E能刺激RPE細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷并產(chǎn)生IL-1β、IL-12b、IL-18等炎癥因子，使RPE細(xì)胞處于炎癥狀態(tài)。正常RPE細(xì)胞通過PGE2-COX2通路發(fā)揮對T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能，而A2E可通過抑制PGE2-COX2通路，激活I(lǐng)L-1β，從而抑制RPE細(xì)胞對Th1細(xì)胞