基于MC3T3-E1細(xì)胞的杜仲抗骨質(zhì)疏松藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其質(zhì)量控制研究.pdf

1、目的：研究杜仲抗骨質(zhì)疏松的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)并建立其合理的質(zhì)量控制方法。
　　方法：采用血清藥理學(xué)研究方法，體外培養(yǎng)MC3T3-E1 Subclone14細(xì)胞，探討杜仲含藥血清對(duì)MC3T3-E1 Subclone14細(xì)胞的影響。并采用血清藥物化學(xué)研究方法，在建立杜仲提取物UHPLC-Q-TOF/MS指紋圖譜的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)比杜仲提取物、含藥血清、空白血清指紋圖譜，找到體內(nèi)移行成分。同時(shí)運(yùn)用譜效關(guān)系分析法，將含藥血清譜(指紋圖譜特征峰峰面

2、積)與效(含藥血清的藥效數(shù)據(jù))進(jìn)行相關(guān)性分析，從含藥血清中篩選出杜仲抗骨質(zhì)疏松的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。運(yùn)用超高效液相色譜儀（UPLC）將指紋圖譜技術(shù)與多指標(biāo)成分定量分析相結(jié)合，對(duì)杜仲藥材進(jìn)行質(zhì)量控制，利用指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)對(duì)杜仲UPLC指紋圖譜進(jìn)行評(píng)價(jià)，并運(yùn)用SPSS軟件對(duì)37批藥材進(jìn)行主成分分析。
　　結(jié)果：杜仲含藥血清能夠有效顯著促進(jìn)MC3T3-E1 Subclone14細(xì)胞增殖及堿性磷酸酶和骨鈣蛋白的分泌，并能夠顯著上調(diào)OPG/

3、RANKL系統(tǒng)的比值，具有促進(jìn)成骨細(xì)胞成熟分化的能力。從杜仲含藥血清中檢測(cè)到了26個(gè)入血成分，明確了7個(gè)原型入血成分分別為京尼平苷酸、原兒茶酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇單葡萄糖苷、1-羥基松脂醇單葡萄糖苷及杜仲醇，譜效關(guān)系分析顯示，其中有6個(gè)特征峰(1、m5、6、m8、m9、m11號(hào))與藥效有顯著關(guān)聯(lián)，京尼平苷酸、京尼平苷對(duì)抗骨質(zhì)疏松活性的貢獻(xiàn)較大。結(jié)合體內(nèi)移行成分及藥材中含量較高的化合物，建立了在同一色譜條件下同時(shí)測(cè)定體內(nèi)移

4、行成分京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇單葡萄糖苷及藥材中含量較高的桃葉珊瑚苷、綠原酸6個(gè)成分的多指標(biāo)控制方法，該方法線性關(guān)系良好，加樣回收率為96.9％～101.0%、RSD﹤3%，精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性良好。同時(shí)測(cè)定了37批杜仲樣品的指紋圖譜，建立了指紋圖譜共有模式，標(biāo)定共有峰18個(gè)，37批杜仲藥材指紋圖譜相似度為0.758～0.980，37批樣品分為4大類。
　　結(jié)論：初步闡明了杜仲藥材抗骨質(zhì)疏松作用的藥效物質(zhì)基