變應(yīng)性鼻炎外周血CD4+T細(xì)胞基因表達(dá)譜研究.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用基因芯片技術(shù)對(duì)變應(yīng)性鼻炎與非變應(yīng)性鼻炎患者外周血 CD4+T細(xì)胞基因表達(dá)譜進(jìn)行分析，根據(jù)試驗(yàn)及對(duì)照組基因表達(dá)譜中各基因探針信號(hào)的強(qiáng)弱，篩選出差異基因，在淋巴細(xì)胞亞群的基因水平上分析變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制，通過(guò)芯片表達(dá)譜的分析，找出疾病相關(guān)基因，或?yàn)樽儜?yīng)性鼻炎的診治提供新的研究方法及方向。
　　方法：
　　應(yīng)用免疫磁珠技術(shù)分選變應(yīng)性鼻炎及非變應(yīng)性鼻炎患者外周血中CD4+ T細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)所分選的外

2、周血中CD4+ T細(xì)胞純度進(jìn)行驗(yàn)證，利用基因芯片技術(shù)制備4例正常對(duì)照組及4例常年性變應(yīng)性鼻炎發(fā)病期患者的外周血CD4+T細(xì)胞芯片，芯片型號(hào)：Affymetrix2.0芯片，對(duì)制備的基因芯片表達(dá)譜行差異基因篩選，通過(guò)表達(dá)譜芯片探針信號(hào)值強(qiáng)弱，篩選出有顯著差異的上、下調(diào)差異基因，最后對(duì)篩選出的差異基因行實(shí)時(shí)定量PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　對(duì)試驗(yàn)組與對(duì)照組外周血中CD4+T細(xì)胞表達(dá)譜中差異基因進(jìn)行分析，其中上調(diào)基因145

3、6條，下調(diào)基因1088條，顯著上調(diào)基因 ANPEP（alanyl(membrane) aminopeptidase）、TLR8（toll-like receptor8，TLR8），其功能涉及免疫應(yīng)答、膜受體結(jié)合活性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞代謝、受體活化及白細(xì)胞移植等途徑；對(duì)其信號(hào)通路分析，發(fā)現(xiàn) ANPEP、TLR8，涉及 Th1/Th2細(xì)胞分化、Toll樣受體活化及 NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑，在變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用。顯著下調(diào)基因S

4、CH1(Src homology2 domain containing)transforming protein1)和STAT5B（signal transducer and activator of transcription5B）等與 IL-2受體激活有關(guān)，抑制免疫應(yīng)答，從另一方面證實(shí)，變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制涉及免疫激活等代謝途徑。
　　對(duì)顯著上、下調(diào)基因行實(shí)時(shí)定量 PCR驗(yàn)證，顯著差異基因?qū)崟r(shí)定量 PCR組間 t檢驗(yàn)結(jié)果示：A

5、NPEP的表達(dá)在AR組明顯增高P＝1.44*10-2；TLR8的表達(dá)在AR組也明顯增高P＝4.38*10-3；SHC1的表達(dá)在AR組則顯著下調(diào)P＝3.01*10-2；STAT5B的表達(dá)在AR組也顯著下調(diào)P=8.8*10-3；各基因組間P值均小于0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)果。
　　將所挑選的差異表達(dá)基因向KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)的各個(gè)條目（term）映射，采用超幾何檢驗(yàn)將各條目總數(shù)與整個(gè)基因組比較，篩選出最顯著的KEGG條目，分析變應(yīng)性鼻炎

6、患者外周血CD4+T細(xì)胞基因表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)上調(diào)基因顯著性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑19條，下調(diào)基因顯著性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑35條，其中主要涉及：PPAR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、細(xì)胞色素酶P450介導(dǎo)的外源性化學(xué)物質(zhì)代謝、VEGF缺氧與血管生成途徑、SHC基因活化途徑、白介素-4信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、SHC介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及ErbB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等信號(hào)通路。
　　結(jié)論：
　　變應(yīng)性鼻炎患者試驗(yàn)組與對(duì)照組外周血CD4+T細(xì)胞表達(dá)譜中，上調(diào)基因1456條，下調(diào)基因10