藍莓花青素對胃癌MGC-803細(xì)胞體內(nèi)外抗癌作用及其機制的研究.pdf

1、研究目的：
　　1.研究藍莓花青素對胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖及凋亡作用，并探究其抗癌機制，為臨床癌癥的治療及防治提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)；
　　2.探究藍莓花青素對裸鼠異位移植瘤的生長抑制作用及其機制。
　　研究方法：
　　1.①體外培養(yǎng)胃癌MGC-803細(xì)胞,分別加入不同濃度的藍莓花青素處理，利用CCK法、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)、Hoechst染色檢測不同濃度的藍莓花青素對MGC-803細(xì)胞增殖和凋亡的影響；②

2、實時熒光定量PCR(real-time PCR）檢測細(xì)胞相關(guān)凋亡基因P53、CCND3、P73、SFN、CASPASE8和FAM200AmRNA的mRNA表達；③蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot)檢測細(xì)胞CASPASE8和P73的蛋白表達水平。
　　2.①構(gòu)建裸鼠胃癌模型，在裸鼠腋窩中下部皮下注射MGC-803細(xì)胞懸液，10天左右待瘤體達到5×5mm3，隨機分三組（陰性對照組，實驗對照組，陽性對照組），分別腹腔注射生理鹽

3、水（normal saline,NS)、藍莓花青素（anthocyanin)、紫衫醇（paclitaxel,PTX)，每隔兩天注射一次，劑量為10mg.kg-1，干預(yù)8周；②期間觀察瘤體和重量變化，繪制瘤體生長曲線以及裸鼠重量變化曲線；③對剝離出的瘤組織進行實時熒光定量PCR(real-time PCR）檢測相關(guān)凋亡基因P53、CCND3、P73、SFN、CASPASE8和FAM200A mRNA的表達；④免疫組織化學(xué)(Immunohi

4、stochemistry)檢測蛋白CASPASE8和P73的表達。
　　研究結(jié)果：
　　1.①藍莓花青素呈時間和劑量依賴性抑制胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖(P<0.05)，呈現(xiàn)劑量依賴性誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，相對空白組，早晚期細(xì)胞凋亡率分別隨藍莓花青素濃度的增加而升高，并且早期凋亡劑量組組間差異顯著(P<0.05)；②相對空白對照組，P53、P73和SFNmRNA表達水平上調(diào)(P<0.05)，并且劑量組組間差異顯著(P<0.05)

5、；CASPASE8和FAM200A表達水平下調(diào)(P<0.05)，但劑量組組間差異不顯著(P>0.05)；CCND3mRNA表達水平變化不顯著(P>0.05)③相對空白對照組，CASPASE8和P73蛋白表達水平分別下調(diào)和上調(diào)(P<0.05)。
　　2.①裸鼠稱重結(jié)果顯示，相對陰對照組，藍莓花青素處理組裸鼠體重變化差異不顯著(P>0.05)；②瘤體測量結(jié)果顯示，相對陰性對照組，藍莓花青素處理組明顯抑制了瘤體的生長(P<0.05)，并

6、且組間差異顯著(P<0.05)；③相對空白對照組CCND3mRNA表達水平顯著上調(diào)(P<0.05)，CASPASE8、P53、FAM200AmRNA表達水平顯著下調(diào)(P<0.05)，P73和SFN表達水平變化不顯著(P>0.05)；④相對陰性對照組，CASPASE8蛋白表達減弱，P73蛋白表達增強。
　　研究結(jié)論：
　　1.體外實驗結(jié)論
　　1)藍莓花青素對胃癌MGC-803細(xì)胞具有增殖抑制以及誘導(dǎo)凋亡的作用，并呈現(xiàn)時

7、間和劑量依賴性；
　　2)藍莓花青素對MGC-803細(xì)胞的抗癌機制與P53、P73、SFN mRNA表達水平均上調(diào)(P<0.05)和CASPASE8、FAM200A mRNA表達水平下調(diào)(P<0.05)相關(guān)，并呈現(xiàn)劑量依賴性。
　　3)藍莓花青素對誘導(dǎo)MGC-803細(xì)胞凋亡與蛋白P73表達上調(diào)和CASPASE8表達下調(diào)相關(guān)。
　　2.體內(nèi)實驗結(jié)論
　　1)胃癌MGC-803細(xì)胞移植成瘤率為100％。
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