BRCAA1基因?qū)ξ赴㎝GC-803細(xì)胞的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討brcaa1基因敲除后對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞的作用機(jī)制。 方法：根據(jù)brcaa1基因序列設(shè)計(jì)shRNA，構(gòu)建brcaa1基因shRNA載體。用FuGene HD將構(gòu)建的shRNA-brcaa1質(zhì)粒與陰性對(duì)照質(zhì)粒shRNA-N轉(zhuǎn)染胃癌MGC-803細(xì)胞，24 h后用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)BRCAA1和GAPDH基因mRNA表達(dá)水平；用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后24 h、48 h與72 h的細(xì)胞增

2、殖水平；用Annxin-V PE/7AAD檢測(cè)轉(zhuǎn)染24 h的細(xì)胞凋亡水平；用Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染48 h后的凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平；構(gòu)建胃癌腫瘤動(dòng)物模型并進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果：BRCAA1 siRNA表達(dá)質(zhì)粒MGC-803細(xì)胞 24 h的轉(zhuǎn)染效率為(81.2±2.6)％。轉(zhuǎn)染后48 h MGC-803細(xì)胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4％；MGC-803細(xì)胞增殖的抑制率達(dá)45.0％；轉(zhuǎn)染siRNA細(xì)

3、胞的凋亡率明顯高于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞和對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞[(14.4±1.6)％VS(5.4±2.0)％，(4.4±2.5)％，P<0.05]。轉(zhuǎn)染siRNA細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白R(shí)b與Bax的表達(dá)量顯著增加（P<0.05），Bcl-2的表達(dá)量顯著減少（P<0.05）；注射BRCAA1 siRNA表達(dá)質(zhì)粒7天后，腫瘤生長(zhǎng)速度顯著下降（P<0.05）。 結(jié)論：BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與