bFGF刺激NF-κB活化誘導人胃癌MGC-803細胞對貝伐珠單抗耐藥.pdf

1、目的：探索堿性成纖維生長因子（bFGF）是否可誘導人胃癌MGC-803細胞對貝伐珠單抗耐藥及其作用機制。
　　方法：1、探索堿性成纖維因子（ bFGF）是否可誘導人胃癌MGC-803細胞對貝伐珠單抗耐藥。實驗分為三組：正常對照組、藥物組、實驗組。a、正常對照組為人胃癌MGC-803細胞；b、藥物組為貝伐珠單抗（22ng/ml）處理人胃癌MGC-803細胞12小時；c、實驗組為bFGF（30ng/ml）處理人胃癌MGC-803細胞1

2、2小時后，再予以貝伐珠單抗（22ng/ml）處理12小時。CCK-8法檢測人胃癌MGC-803細胞的增殖抑制情況。
　　2、探索bFGF誘導人胃癌MGC-803細胞對貝伐珠單抗耐藥的機制。實驗分為三組：實驗組、陰性對照組、陽性對照組。a、實驗組為bFGF（30ng/ml）預處理人胃癌MGC-803細胞12小時，再予以貝伐珠單抗（22ng/ml）處理12小時；b、陰性對照組為bFGF（30ng/ml）預處理人胃癌MGC-803細胞1

3、2小時，加入NF-κB抑制劑二硫氨基甲酸酞吡咯烷（PDTC）（10μmol/L）處理30分鐘，再加入貝伐珠單抗（22ng/ml）作用12小時；c、陽性對照組為NF-κB激動劑腫瘤壞死因子α（TNF-α）（30ng/ml）預處理人胃癌MGC-803細胞30分鐘，再加入貝伐珠單抗（22ng/ml）作用12小時。Western Blot法檢測MGC-803細胞核內(nèi)及細胞質(zhì)內(nèi)NF-κB蛋白的表達情況；用免疫細胞化學法觀察NF-κB核轉(zhuǎn)位（活化）

4、情況。
　　結(jié)果：1、藥物組經(jīng)貝伐珠單抗處理12小時后，人胃癌MGC-803細胞的相對活力明顯下降，貝伐珠單抗可抑制人胃癌MGC-803細胞的增殖。而經(jīng)bFGF預處理12小時后，人胃癌MGC-803細胞的相對活力較藥物組明顯增加，其對貝伐珠單抗的敏感性明顯下降；
　　2、經(jīng)bFGF預處理12小時的人胃癌MGC-803細胞，在NF-κB抑制劑PDTC的作用下，細胞的相對活力較單純bFGF處理12小時的細胞明顯下降，細胞對貝伐珠

5、單抗的敏感性明顯增加，PDTC可逆轉(zhuǎn) bFGF誘導人胃癌 MGC-803細胞對貝伐珠單抗耐藥；經(jīng) NF-κB激動劑TNF-α處理30分鐘后，人胃癌MGC-803細胞的相對活力較單純貝伐珠單抗處理12小時的細胞明顯增加，細胞對貝伐珠單抗的敏感性明顯下降；
　　3、經(jīng)bFGF預處理12小時后的細胞及經(jīng)NF-κB激動劑TNF-α預處理30分鐘后的細胞核內(nèi)的 NF-κB蛋白表達較單純貝伐珠單抗處理12小時的細胞明顯增加，而細胞質(zhì)內(nèi)的 NF

6、-κB蛋白的表達則恰好相反，bFGF與TNF-α一樣，可誘導NF-κB活化（核轉(zhuǎn)位）；經(jīng)bFGF預處理12小時的人胃癌MGC-803細胞，在NF-κB抑制劑PDTC作用30分鐘后，細胞核內(nèi)的NF-κB蛋白的表達較單純bFGF處理12小時的細胞明顯下降，細胞質(zhì)內(nèi)的 NF-κB蛋白表達則明顯增加，PDTC可逆轉(zhuǎn)bFGF誘導NF-κB活化（核轉(zhuǎn)位）；
　　4、經(jīng)bFGF處理12小時的細胞及經(jīng)NF-κB激動劑TNF-α處理30分鐘的細胞胞