硼替佐米與高三尖杉酯堿在K562細(xì)胞中的聯(lián)合作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：
　　（1）觀察硼替佐米（Bortezomib，BTZ）、高三尖杉酯堿(Homoharringonine， HHT)兩者單藥及聯(lián)合對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　（2）探討硼替佐米及高三尖杉酯堿對(duì)K562細(xì)胞的聯(lián)合作用機(jī)制與Bcl-2、Bax、Mcl-1蛋白表達(dá)量的關(guān)系。
　　研究方法：
　　將K562細(xì)胞株按不同處理分為4組：①BTZ(20nmol/L)組②HHT(40ng/mL)組③BTZ(2

2、0nmol/L)+HHT(40ng/mL)聯(lián)合組④對(duì)照組。
　　1、采用MTT方法檢測(cè)各處理組中K562細(xì)胞增殖抑制率的變化。
　　2、采用Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)各處理組中K562細(xì)胞早期凋亡率的變化。
　　3、采用Western Blot方法測(cè)定各處理組中Bcl-2、Bax及Mcl-1蛋白相對(duì)表達(dá)量的變化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1、在BTZ的0～160nmol/L濃度范圍內(nèi)，K56

3、2細(xì)胞的增殖抑制率隨BTZ濃度的增加而增加（與對(duì)照組比較，p<0.05）。在24～72h內(nèi)，同濃度BTZ作用于K562細(xì)胞的增殖抑制率隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加（組間比較p<0.05）。BTZ作用K562細(xì)胞24h、48h、72h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為91.36nmol/L、44.25nmol/L、20.34nmol/L。
　　2、在HHT的0～320ng/ml濃度范圍內(nèi)，K562細(xì)胞的增殖抑制率隨HHT濃度的增加而增加（與

4、對(duì)照組比較，p<0.05）。在24～72h內(nèi)，同濃度HHT作用于K562細(xì)胞的增殖抑制率隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加（組間比較p<0.05）。HHT作用K562細(xì)胞24h、48h、72h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為148.92ng/ml、61.48ng/ml、35.65ng/ml。
　　3、20nmol/L BTZ作用K562細(xì)胞24h、48h、72h后的增殖抑制率分別為24.29±1.38、38.36±0.97、49.30±1.6

5、6（與對(duì)照組比較，p<0.001）；40ng/mL HHT作用K562細(xì)胞24h、48h、72h后的增殖抑制率(％)分別為29.10±1.54、39.78±1.86、50.71±2.26（與對(duì)照組比較，p<0.001）；BTZ+HHT聯(lián)合作用K562細(xì)胞24h、48h、72h后的增殖抑制率(%)分別為48.58±2.18、69.87±1.86、84.48±1.84。BTZ、HHT單藥與聯(lián)合組比較有差異（p<0.01）。
　　進(jìn)一步

6、行相互作用分析表明在不同時(shí)間點(diǎn)BTZ+HHT聯(lián)合組增殖抑制率均有IR(BTZ+HHT)>IR(BTZ)+IR(HHT)-IR(BTZ)*IR(HHT)。
　　4、對(duì)照組、BTZ單藥組、HHT單藥組、聯(lián)合組K562細(xì)胞的早期凋亡率(%)分別為2.36±0.56、8.09±0.81、8.93±0.82、21.13±1.90。BTZ及HHT單藥組高于對(duì)照組（p<0.05），聯(lián)合組均高于BTZ、HHT單藥組（p<0.05）。
　　5

7、、對(duì)照組、BTZ單藥組、HHT單藥組、聯(lián)合組K562細(xì)胞的Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.00、0.77±0.28、0.78+0.04、0.18±0.02（與對(duì)照組比較，p<0.05）。BTZ、HHT單藥組低于對(duì)照組（p<0.05），聯(lián)合組低于BTZ及HHT單藥組（p<0.05）。
　　6、對(duì)照組、BTZ單藥組、HHT單藥組、聯(lián)合組K562細(xì)胞的Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.00、1.77±0.09、2.02

8、±0.09、2.53±0.12。BTZ、HHT單藥組高于對(duì)照組（p<0.05），聯(lián)合組高于BTZ及HHT單藥組（p<0.05）。
　　7、對(duì)照組、BTZ單藥組、HHT單藥組、聯(lián)合組K562細(xì)胞的Mcl-1蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.00、1.25±0.05、0.75±0.03、0.87±0.02。不同處理組Mcl-1蛋白相對(duì)表達(dá)量高低：BTZ組＞對(duì)照組＞BTZ+HHT聯(lián)合組＞HHT組（組間比較p<0.05）。
　　結(jié)論

9、：
　　1、BTZ、HHT對(duì)K562細(xì)胞株均有抑制增殖作用，且均呈劑量、時(shí)間依賴性。BTZ與HHT聯(lián)合可起協(xié)同抑制細(xì)胞增殖效應(yīng)。
　　2、BTZ、HHT對(duì)K562細(xì)胞株均有誘導(dǎo)凋亡作用，BTZ與HHT聯(lián)合誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)更明顯。
　　3、BTZ、HHT可下調(diào)K562細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)，兩藥聯(lián)合時(shí)Bcl-2蛋白下調(diào)更明顯。
　　4、BTZ、HHT可上調(diào)K562細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)，兩藥聯(lián)合時(shí)Bax蛋白上調(diào)更明顯。