SAHA聯(lián)合高三尖杉酯堿HHT抑制人AML細(xì)胞生長(zhǎng)的研究.pdf

1、背景:白血病是由一系列與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化與死亡相關(guān)的眾多基因變異所導(dǎo)致的異質(zhì)性疾病,是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤?；熀鸵浦彩悄壳鞍籽≈委煹闹饕侄?但大多數(shù)患者只能獲得短暫緩解,最終因復(fù)發(fā)或耐藥而死亡。高三尖杉酯堿(HHT)是化療的常用藥物,但劑量大時(shí)病人容易出現(xiàn)副反應(yīng)。細(xì)胞分化異常是白血病發(fā)生的重要原因之一,深入認(rèn)識(shí)細(xì)胞分化及異常的發(fā)生機(jī)制可以為白血病的治療提供新的手段。組蛋白去乙酰化酶抑制劑(histone deacetylase inh

2、ibitor,HDACi)是以組蛋白乙?；揎棡樽饔冒悬c(diǎn)的新的抗血液腫瘤藥物,很多研究顯示,HDACi能夠通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和分化、促使細(xì)胞周期阻滯而抑制血液腫瘤細(xì)胞增殖。目前,多種HDACi已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段,并且顯示出較好的抗血液腫瘤療效。
　　 設(shè)計(jì)及目的:
　　 本課題組選用的SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)是繼HMBA(hexamethylenebisacetamide

3、)之后的第二代羥肟酸類的組蛋白去乙?；敢种苿?histon dcacctylase inhibitor,HDACi)。目前,SAHA已經(jīng)在美國進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)。研究表明,SAHA可以選擇性誘導(dǎo)細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控子p21的表達(dá),從而阻滯細(xì)胞周期,同時(shí)可以誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的分化和凋亡,但其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制還不十分清楚。高三尖杉?jí)A酯(HHT)是從粗榧科植物三尖杉或其同屬植物中提出的有抗癌作用的生物酯堿,能抑制真核細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成,使多聚核

4、糖體解聚,干擾蛋白核體糖功能,對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA的合成亦有抑制作用。本研究將在SAHA特異性抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的基礎(chǔ)上,聯(lián)合HHT治療白血病,減少化療藥物HHT的注射量,其協(xié)同效應(yīng)有可能使血癌治療取得更加滿意的療效。
　　 方法:
　　 (1)通過細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn),確定SAHA和HHT對(duì)急性髓系白血病(AML)細(xì)胞THP-1和Kasumi-1具有聯(lián)合殺傷作用;(2)通過形態(tài)學(xué)分析,凋亡細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn),電鏡觀察SAHA和HHT聯(lián)合誘

5、導(dǎo)的凋亡。(3)通過western blot尋找SAHA和HHT共同作用的凋亡信號(hào)通路。(4)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SAHA和HHT的體內(nèi)殺傷作用。
　　 結(jié)果:
　　 體外實(shí)驗(yàn)表明SAHA和HHT聯(lián)合使用對(duì)AML細(xì)胞系THP-1和Kasumi-1具有更強(qiáng)的殺傷作用,它們是通過TRAIL介導(dǎo)的細(xì)胞外凋亡途徑來激活caspase家族的。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,SARA和HHT聯(lián)用能顯著抑制SCID小鼠瘤體的生長(zhǎng),沒有副作用,在一定程度上為臨床