異三尖杉酯堿(isoharringtonine)對(duì)三階性乳腺癌的抑制作用研究.pdf

1、在乳腺癌所有亞型中，三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是惡性程度較高的一種，在臨床上表現(xiàn)為高轉(zhuǎn)移，高復(fù)發(fā)和低治愈率的特點(diǎn)。由于缺乏ER受體、PR受體和HER2受體不表達(dá)或低表達(dá)，因此靶向特異受體的激素治療無(wú)法應(yīng)用于TNBC的治療。新輔助治療方案是用于TNBC治療的主要手段，并在臨床上取得了一定的治療效果，但是所用的化療藥物會(huì)誘使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生藥物耐藥性和無(wú)法克服乳腺癌的復(fù)發(fā)問(wèn)題。而目前的腫

2、瘤干細(xì)胞理論認(rèn)為腫瘤干細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞中能夠自我更新，分化和增殖，起始腫瘤的發(fā)生，具有類似正常干細(xì)胞特性的一小群細(xì)胞，因而又被稱為腫瘤起始細(xì)胞(tumor initiation cells，TICs)，對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，腫瘤的耐藥性，腫瘤的復(fù)發(fā)起至關(guān)重要的作用。因此，對(duì)于腫瘤干細(xì)胞和靶向乳腺癌干細(xì)胞藥物的研究成為日益受關(guān)注的焦點(diǎn)。
　　多種信號(hào)通路參與腫瘤干細(xì)胞的調(diào)控，相關(guān)的信號(hào)通路主要有以下幾種:Wnt信號(hào)通路、Notch信號(hào)通路

3、、Hedgehog信號(hào)通路、TGF-β/BMP信號(hào)通路以及Jak/Stat信號(hào)通路等。例如Wnt信號(hào)通路促進(jìn)干細(xì)胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子NANOG,SOX2和OCT4表達(dá)，而STAT3能夠與NANOG的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合啟動(dòng)NANOG的轉(zhuǎn)錄，從而影響的細(xì)胞的干性。在乳腺癌中，對(duì)與乳腺癌干細(xì)胞(breast cancer stem cells，BCSCs)群CD44+CD24-細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)維持，JAK2/STAT3信號(hào)通路是必須的。
　　異三尖杉酯

4、堿(isoharringtonine，IHT)，是一種從三尖杉(Cephalotaxus harringtonia)中提取的生物酯堿類化合物，與高三尖杉酯堿(homoharringtonine，HHT)是類似物。目前關(guān)于IHT的研究報(bào)道甚少，而對(duì)于HHT的研究則很多。在臨床上，HHT主要用于骨質(zhì)增生綜合征，慢性白血病和急性白血病的治療。HHT可以促進(jìn)細(xì)胞的凋亡和抑制JAK1/STAT3信號(hào)通路。雖然關(guān)于HHT對(duì)乳腺干細(xì)胞的作用效果并沒(méi)有

5、研究，但是其作用機(jī)制暗示了HHT可能會(huì)抑制BCSCs，IHT對(duì)腫瘤干細(xì)胞也有抑制效果，機(jī)制也可能相似。在本研究中，基于IHT與HHT的結(jié)構(gòu)的不同，我們探究了IHT對(duì)乳腺癌細(xì)胞干細(xì)胞的抑制作用和機(jī)制。
　　目前TNBC的治療藥物會(huì)誘使乳腺癌于細(xì)胞的增加而改變?nèi)橄俚漠愘|(zhì)性提高對(duì)治療藥物的耐藥性，如紫杉醇，且并不能抑制乳腺癌的復(fù)發(fā)。而目前認(rèn)為乳腺癌干細(xì)胞參與起始乳腺的發(fā)生發(fā)展，乳腺細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，免疫系統(tǒng)的逃逸和對(duì)轉(zhuǎn)移灶微環(huán)境的改造，由于上

6、述因素進(jìn)而導(dǎo)致乳腺癌化療藥物的耐藥性，因此靶向乳腺癌干細(xì)胞的治療方案成為克服以上問(wèn)題的一個(gè)研究關(guān)注點(diǎn)。本研究通過(guò)MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IHT對(duì)TNBC細(xì)胞增殖的作用，wound healing assay實(shí)驗(yàn)分析IHT對(duì)細(xì)胞遷移的影響，流式細(xì)胞術(shù)探究IHT對(duì)TNBC癌干細(xì)胞的抑制效果以及對(duì)STAT3蛋白水平和NANOG的轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)揭示IHT可能的機(jī)制。結(jié)果顯示，在0nM到300nM和0nM到600nM濃度范圍內(nèi)的IHT處理細(xì)胞24h后，IHT

7、可以抑制TNBC細(xì)胞系HCC1806和HCC1937細(xì)胞的增殖，隨著濃度升高，抑制效果越顯著，而在此濃度范圍內(nèi)并不引起HCC1806或HCC937的凋亡或死亡。同樣的濃度和處理?xiàng)l件下，IHT不僅對(duì)HCC1806或HCC1937細(xì)胞的遷移有顯著的抑制效果，而且也能減少細(xì)胞群中BCSCs(CD44+CD24-)細(xì)胞的比例，soft-agar clone和tumorsphere形成分析佐證了流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果。Western blot的檢測(cè)結(jié)果

8、發(fā)現(xiàn)，在以上濃度的IHT處理HCC1806或HCC1937細(xì)胞24h后，p-STAT3的水平顯著下降，同時(shí)我們檢測(cè)了STAT3的下游基因NANOG的轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)NANOG的轉(zhuǎn)錄受抑制效果顯著，而NANOG是腫瘤干細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)維持的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，雖然IHT的機(jī)制與HHT類似，能夠抑制STAT3的蛋白水平，但不同的是，IHT并不導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡。雖然在蛋白水平并未檢測(cè)到EMT標(biāo)記分子和細(xì)胞周期蛋白的變化，但根據(jù)結(jié)果分析，IHT很可能通過(guò)對(duì)ST