烏苯美司聯(lián)合高三尖杉酯堿對(duì)急性粒細(xì)胞白血病(M1)細(xì)胞增殖與凋亡的研究.pdf

1、目的:
　　探討不同濃度烏苯美司(Ubenimex)、高三尖杉酯堿(Homoharringtonine, HHT)及兩藥聯(lián)合對(duì)急性粒細(xì)胞白血病(M1)細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　方法:
　　不同濃度的烏苯美司(Ube)、高三尖杉酯堿(HHT)及兩藥聯(lián)合作用于急性粒細(xì)胞白血病(M1)細(xì)胞24h、48h、72h,CCK-8法分別檢測(cè)急性粒細(xì)胞白血病( M1)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。以烏苯美司(1.0μg/ml)、高三尖杉酯堿(0

2、.01μg/ml)、兩藥聯(lián)合為實(shí)驗(yàn)組,未加藥物為對(duì)照組,培養(yǎng)48h后,觀察細(xì)胞形態(tài)變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞表面分化抗原 CD13的表達(dá)率;半定量PCR技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞C-myc基因 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、0.001μg/ml、0.005μg/ml、0.01μg/ml、0.05μg/ml、0.1μg/ml,5個(gè)濃度梯度的 HHT分別作用于 AML-M1細(xì)胞48h,抑制率分別為(13.75±3.0

3、1)％,(17.61±3.22)%,(35.07±5.91)%,(77.62±4.54)%,(84.51±7.63)%,(P<0.05),通過(guò)加權(quán)直線回歸法計(jì)算可知 HHT48h半數(shù)抑制濃度(IC50)值為0.0398μg/ml,選取0.01μg/ml HHT作為單藥實(shí)驗(yàn)濃度;
　　Ube0.01μg/ml、0.1μg/ml、1.0μg/ml、10μg/ml、100μg/ml處理48h抑制率分別為(18.85±1.54)%,(27

4、.52±1.87)%,(36.09±2.79)%,(69.32±4.21)%,(80.59±5.32)%,(P<0.05),Ube對(duì) AML-M1的抑制作用呈濃度依賴(lài)性,加權(quán)直線回歸法計(jì)算可知Ube48h IC50值為5.510μg/ml,選取1.0μg/ml Ube作為實(shí)驗(yàn)濃度;
　　2、AML-M1細(xì)胞與 Ube(1.0μg/ml)共培養(yǎng)48h后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯變化,可見(jiàn)細(xì)胞皺縮、不規(guī)則等變化;
　　3、AML-M1

5、細(xì)胞經(jīng) Ube不同作用時(shí)間處理后,出現(xiàn)不同程度的抑制,隨著濃度(0.01μg/ml、0.1μg/ml、1.0μg/ml、10μg/ml、100μg/ml)增加,抑制率分別為24h(3.42±0.76)%,(10.69±1.63)%,(18.92±2.13)%,(36.81±3.73)%,(66.94±7.84)%(P<0.05),48小時(shí)抑制率為(15.16±2.46)%,(28.61±2.09)%,(40.76±2.36)%,(62.

6、35±4.87)%,(74.74±7.87)%,(P<0.05),72小時(shí)抑制率為(28.35±2.87)%,(35.95±2.65)%,(45.94±3.56)%(71.05±4.76)%,(90.07±7.93)%,(P<0.05),抑制作用逐漸增強(qiáng),并呈時(shí)間依賴(lài)性,與對(duì)照組相比,Ube對(duì)AML-M1細(xì)胞產(chǎn)生了明顯的抑制作用;
　　經(jīng)上述5個(gè)濃度梯度 Ube聯(lián)合 HHT(0.01μg/ml)作用 AML-M1細(xì)胞后,24h的生

7、長(zhǎng)抑制率為(19.82±2.32)%,(29.76±3.46)%,(35.16±2.07)%,(54.72±4.22)%,(70.61±5.35)%,(P<0.05),48小時(shí)抑制率為(36.54±2.98)%,(40.53±2.78)%,(49.83±2.76)%,(68.21±4.87)%,(87.93±8.09)%,(P<0.05),72小時(shí)抑制率為(50.79±3.19)%,(55.24±3.21)%,(64.24±5.76)%

8、,(77.84±5.08)%,(95.92±6.43)%,(P<0.05),及HHT單藥組24h生長(zhǎng)抑制率為(17.56±2.15)%,48小時(shí)抑制率為(32.12±2.63)%,72小時(shí)抑制率為(44.76±2.67)%,聯(lián)合組對(duì)AML-M1細(xì)胞的抑制作用呈濃度-時(shí)間依賴(lài)性,聯(lián)合組的抑制作用均明顯高于HHT及 Ube單藥組。
　　4、Ube(1.0μg/ml)與HHT(0.01μg/ml)及聯(lián)合用藥處理AML-M1細(xì)胞48h,

9、Ube單藥的凋亡率(60.16±3.25)%與對(duì)照組(0.16±0.015)%.相比(P<0.05) AML-M1凋亡率明顯升高,聯(lián)合組(78.84±4.80)%與HHT組(32.82±2.25)%及Ube(60.16±3.25)%相比(P<0.05),凋亡率明顯升高;
　　5、Ube(1.0μg/ml)與HHT(0.5μg/ml)及聯(lián)合用藥處理AML-M1細(xì)胞48小時(shí), Ube單藥CD13表達(dá)率為(50.16±3.29)%與對(duì)照

10、組(85.40±4.52)%相比(P<0.05),明顯下調(diào),聯(lián)合用藥組(36.81±2.25)%與 HHT單藥組(65.82±3.97)%及 Ube單藥(50.16±3.29)%相比(P<0.05)明顯下調(diào),Ubx可下調(diào)細(xì)胞表面分化抗原CD13的表達(dá)。
　　6、RT-PCR結(jié)果顯示,Ube(10μg/ml)作用48小時(shí)后C-myc的表達(dá)率為(36.79±4.83)%明顯低于對(duì)照組(87.72±5.61)%( P<0.05),聯(lián)合用

11、藥組(24.71±4.60)%明顯低于 HHT單藥組(48.64±5.57)%及 Ube單藥組(36.79±4.83)%(P<0.05),推測(cè)Ube可能下調(diào)C-myc基因的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1、Ube對(duì)AML-M1細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用;
　　2、Ube與HHT聯(lián)合作用效果優(yōu)于單藥組;
　　3、Ube可促進(jìn)AML-M1細(xì)胞凋亡;
　　4、Ube能下調(diào)細(xì)胞表面分化抗原CD13的表達(dá);
　　5、