高三尖杉酯堿誘導(dǎo)急性髓系白血病SHI-1細(xì)胞凋亡及對(duì)MiR-143、DNMT3A、PTEN基因表達(dá)的研究.pdf

1、急性髓系白血病(AML)為血液系統(tǒng)惡性腫瘤性疾病,目前臨床上治療方法以化學(xué)藥物治療為主。雖然大多數(shù)AML患者接受強(qiáng)化治療能達(dá)到完全緩解,但是復(fù)發(fā)的概率仍然很高,五年總生存率低,使之成為嚴(yán)重危害人類健康的惡性疾病之一。急性單核細(xì)胞白血病(AML-M5)是急性髓系白血病的一種難治特殊亞型,治療效果較差。本課題組前期研究從我國特有植物三尖杉屬海南粗榧中提取分離出的生物堿高三尖杉酯堿(Homoharringtonine,HHT)對(duì)急性髓系白血病

2、細(xì)胞增殖信號(hào)PI3K/Akt的靶向作用以及急性髓系白血病細(xì)胞凋亡的途徑出發(fā),發(fā)現(xiàn)HHT具有能夠體外抑制急性早幼粒細(xì)胞白血病(AML-M3)細(xì)胞株NB4生長(zhǎng)的作用,并可在一定范圍內(nèi)可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,凋亡率呈劑量依賴性。基于此結(jié)果,本研究分別用不同濃度誘導(dǎo)AML-M5-SHI-1細(xì)胞凋亡,進(jìn)一步通過測(cè)定相關(guān)基因等變化探究HHT誘導(dǎo)SHI-1細(xì)胞凋亡可能的機(jī)制,為此后急性髓系白血病的靶向治療和聯(lián)合治療提供依據(jù)。
　　目的研究高三尖杉酯堿

3、(Homoharringtonine,HHT)作用于急性單核細(xì)胞白血病(AML-M5)SHI-1細(xì)胞株的機(jī)制,是否可抑制AML-M5細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;了解HHT對(duì)AML-M5 SHI-1細(xì)胞膜電位的影響,即其誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是否通過線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑實(shí)現(xiàn)。以及HHT對(duì)miRNA-143、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNA methyltransferase3A,DNMT3A)、PTEN基因表達(dá)的影響,初步探討miRNA-143、D

4、NMT3A與PTEN-PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路的關(guān)系
　　方法將不同濃度(5、10、50、100、500μg/L)的HHT作用SHI-1細(xì)胞,瑞氏染色觀察細(xì)胞鏡下形態(tài)學(xué)改變、流式細(xì)胞術(shù)Annexin V/PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡、CCK-8法測(cè)細(xì)胞增殖抑制作用、線粒體膜電位試劑盒(線粒體染料JC-1活細(xì)胞染色)檢測(cè)線粒體跨膜膜電位(Δψm)變化。莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR及RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞PTEN、DNMT3A基因mRNA及mi

5、R-143在藥物作用前及不同濃度藥物作用下表達(dá)。
　　結(jié)果 HHT能有效抑制SHI-1細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡,隨著藥物濃度的增高,細(xì)胞凋亡率、增殖抑制率明顯增加(P<0.05)。流式細(xì)胞儀線粒體膜電位結(jié)果表明,HHT作用后存在明顯熒光變化,細(xì)胞線粒體膜電位下降,并成濃度相關(guān)性。HHT藥物干預(yù)前后SHI-1細(xì)胞株miR-143、DNMT3A及PTEN基因mRNA表達(dá)有明顯變化。其中 miRNA-143在處理前腫瘤細(xì)胞中表達(dá)低于普通對(duì)

6、照細(xì)胞,在凋亡細(xì)胞中表達(dá)增高,其表達(dá)量與其靶基因DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。PTEN基因mRNA在藥物處理前表達(dá)低,處理后表達(dá)高,且與藥物濃度呈一定相關(guān)性,其結(jié)果與 miRNA-143表達(dá)檢測(cè)結(jié)果相平行。HHT能有效抑制 SHI-1細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡,隨著藥物濃度的增高,細(xì)胞凋亡率、增殖抑制率明顯增加(P<0.05)。流式細(xì)胞儀線粒體膜電位結(jié)果表明,HHT作用后存在明顯熒光變化,細(xì)胞線粒體膜電位下降,并成濃度相關(guān)性。HHT

7、藥物干預(yù)前后SHI-1細(xì)胞株miR-143、DNMT3A及PTEN基因mRNA表達(dá)有明顯變化。其中miRNA-143在處理前腫瘤細(xì)胞中表達(dá)低于普通對(duì)照細(xì)胞,在凋亡細(xì)胞中表達(dá)增高,其表達(dá)量與其靶基因 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。PTEN基因mRNA在藥物處理前表達(dá)低,處理后表達(dá)高,且與藥物濃度呈一定相關(guān)性,其結(jié)果與miRNA-143表達(dá)檢測(cè)結(jié)果相平行。
　　結(jié)論 HHT可抑制AML-M5 SHI-1細(xì)胞株的增殖、誘導(dǎo)其凋亡