EAE小鼠腦及脊髓組織中IL-17及c-Maf表達(dá)與病程關(guān)系的研究.pdf

1、目的：
　　探討IL-17及c-Maf在實(shí)驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE）小鼠不同發(fā)病時期腦及脊髓組織中的動態(tài)變化，進(jìn)一步探討IL-17及c-Maf在EAE的發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：
　　按照隨機(jī)數(shù)字法將36只10-12周齡，體重在18-22g之間的雌性C57BL/6小鼠，分為EAE組18只和對照組18只。本研究采用髓鞘少突細(xì)胞糖蛋白

2、（myelinoligodendrocyteglycoprotein，MOG）35-55多肽/完全弗氏佐劑（CFA）的方法免疫C57BL/6小鼠制備EAE模型。對照組小鼠僅給予生理鹽水注射。每天觀察每只小鼠的臨床表現(xiàn)，稱重并參照評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能評分。將免疫后第10天記為發(fā)病前期，第18天記為發(fā)病高峰期，第30天記為緩解期，并在兩組中分別取材，記為發(fā)病高峰期組和緩解期組。將兩組小鼠按不同時期處死后取腦組織做石蠟切片，觀察炎癥細(xì)胞浸潤的

3、情況，取脊髓組織做LFB染色，觀察脫髓鞘情況。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR）檢測各時期兩組小鼠腦及脊髓組織中IL-17mRNA及c-MafmRNA含量并進(jìn)行比較，觀察各個時期的動態(tài)表達(dá)情況。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以x±SD表示，所有數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗和正態(tài)性檢驗，比較采用t檢驗，多組間參數(shù)比較采用單因素方差分析

4、，計量資料組間比較進(jìn)行方差分析和q檢驗。檢驗水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05作為差異顯著性指標(biāo)。
　　結(jié)果：
　　1、動物發(fā)病情況：EAE組的小鼠均出現(xiàn)臨床癥狀，體重明顯下降，平均體重均低于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；且EAE組神經(jīng)功能評分均高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　2、組織病理學(xué)觀察：
　　2.1HE染色
　　2.1.1發(fā)病前期：EAE組中小鼠的腦組織中發(fā)現(xiàn)少數(shù)單核細(xì)胞

5、和淋巴樣細(xì)胞浸潤，未見血管袖套樣改變。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現(xiàn)。
　　2.1.2發(fā)病高峰期：EAE小鼠的腦組織中出現(xiàn)大量單核細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞浸潤和血管袖套樣改變。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現(xiàn)。
　　2.1.3緩解期：EAE小鼠的腦組織中單核樣細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞減少，血管袖套樣改變消失。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現(xiàn)。
　　2.2LFB染色
　　2.2.1發(fā)病前期：EAE小鼠的脊髓組織中出現(xiàn)白質(zhì)疏

6、松。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現(xiàn)。
　　2.2.2發(fā)病高峰期：EAE小鼠的脊髓組織中可見明顯脫髓鞘改變。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現(xiàn)。
　　2.2.3緩解期：EAE小鼠的脊髓組織中可見脫髓鞘改變。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現(xiàn)。
　　3、腦組織中IL-17mRNA及c-MafmRNA的含量及動態(tài)變化
　　3.1腦組織中IL-17mRNA的含量：
　　3.1.1發(fā)病前期：EAE組小鼠的腦

7、組織中IL-17mRNA表達(dá)比對照組高，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.1.2發(fā)病高峰期：EAE組小鼠的腦組織中IL-17mRNA表達(dá)明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.1.3緩解期：EAE組小鼠的腦組織的IL-17mRNA表達(dá)高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.1.4動態(tài)變化：對照組中，IL-17mRNA在各時間點(diǎn)的表達(dá)差距不大，沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。EAE

8、組中，IL-17mRNA各時間點(diǎn)表達(dá)顯示，發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.2腦組織中c-MafmRNA的含量：
　　3.2.1發(fā)病前期：EAE組的c-MafmRNA表達(dá)較對照組高，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.2.2發(fā)病高峰期：EAE組的c-MafmRNA表達(dá)明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.2.3緩解期：EAE組的c-MafmRNA表達(dá)

9、高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.2.4動態(tài)變化：空白對照組各時間點(diǎn)c-MafmRNA表達(dá)差距不大，沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。EAE組各時間點(diǎn)c-MafmRNA表達(dá)發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4、脊髓組織中IL-17mRNA及c-MafmRNA的含量及動態(tài)變化
　　4.1脊髓組織中IL-17mRNA的含量：
　　4.1.1發(fā)病前期：EAE組的IL

10、-17mRNA表達(dá)較對照組高，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4.1.2發(fā)病高峰期：EAE組的IL-17mRNA表達(dá)明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4.1.3緩解期：EAE組的IL-17mRNA表達(dá)高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4.1.4動態(tài)變化：對照組各時間點(diǎn)IL-17mRNA表達(dá)差距不大，沒有統(tǒng)計學(xué)意差異（P>0.05）。EAE組各時間點(diǎn)IL-17mRNA表達(dá)發(fā)病高峰期

11、高于發(fā)病前期和緩解期，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4.2脊髓組織中c-MafmRNA的含量：
　　4.2.1發(fā)病前期：EAE組的c-MafmRNA表達(dá)較對照組高，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4.2.2發(fā)病高峰期：EAE組的c-MafmRNA表達(dá)明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　4.2.3緩解期：EAE組的c-MafmRNA表達(dá)高于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。