IL-17對小鼠脊髓星形膠質細胞相關炎性因子及A20、NF-κB蛋白表達影響的研究.pdf

1、中樞神經系統（CNS）中，星形膠質細胞對維持神經系統功能的穩(wěn)定以及正常的信息傳遞具有極其重要的作用；同時在免疫反應以及神經疾病的病理生理過程中，參與神經免疫及神經組織的發(fā)育與再生修復，并發(fā)揮重要作用。目前，中樞神經損傷的治療依然十分困難，比如脊髓損傷（SCI）的治療。一方面是因為，中樞神經系統組織損傷之后，其再生和修復的能力較弱，因而在受到損傷后若要恢復正常比較困難；另一方面則是，損傷后的一些病理改變可以促進并加劇了損傷部位相關的炎性反

2、應，從而最終影響了脊髓功能的正?；謴汀Ｑ芯勘砻?，SCI后一系列細胞炎性因子誘導的繼發(fā)炎性反應可加重SCI程度，如水腫、炎癥反應、局部缺血、再灌注損傷及過氧化集團異常變化等，從而對脊髓的正常生理功能造成嚴重損傷。在正常的脊髓中，星形膠質細胞為神經元的代謝提供支持，但在中樞神經系統損傷后，損傷部位的星形膠質細胞被激活，這些活化后的星形膠質細胞又被稱為反應性星形膠質細胞，它們可分泌多種炎性因子，如腫瘤壞死因子（TNF）、白細胞介素（IL）、干

3、擾素（IFN）等。這些改變進一步促進了更多的星形膠質細胞被激活，同時又可造成大量膠質瘢痕的形成。因此，研究相關炎性因子對星形膠質細胞的影響及作用機制可以為未來SCI的臨床治療提供理論依據，具有重要意義。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：白介素17對小鼠脊髓星形膠質細胞表達相關炎性因子的影響。
　　目的：研究白介素17對小鼠脊髓星形膠質細胞產生相關炎性因子的表達。
　　方法：首先，在體外培養(yǎng)小鼠脊髓星形膠質細胞。之后，

4、使用不同濃度的IL-17（10、20、50、100、200 ng/ml）刺激體外培養(yǎng)小鼠脊髓星形膠質細胞，并于不同時間點（3h、6h、12h、24h和48h）行酶聯免疫吸附檢測（ELISA）法和qRT-PCR檢測IL-6、TNF-α、MIP-2、MCP-1/5的表達。
　　結果：與對照組相比，實驗組小鼠脊髓星形膠質細胞在IL-17刺激6h和12h時間點上，IL-6、TNF-α、MCP-1/5和MIP-2所對應的mRNA和蛋白的表達

5、水平分別顯著升高（p<0.05）。
　　結論：IL-17刺激小鼠脊髓星形膠質細胞之后，可以促進其產生和表達相關炎性因子，而且還具有明顯的時效性。
　　第二部分：白介素17對小鼠脊髓星形膠質細胞表達A20、NF-κB調控蛋白的影響。
　　目的：研究白介素17對小鼠脊髓星形膠質細胞表達A20、NF-κB調控蛋白的影響。
　　方法：首先，在體外培養(yǎng)小鼠脊髓星形膠質細胞。之后，使用IL-17（50ng/ml）刺激體外培養(yǎng)

6、小鼠脊髓星形膠質細胞，并于不同時間點（3h、6h、12h、24h和48h）行蛋白質免疫印跡法（WB）和qRT-PCR檢測A20、NF-κB的表達。
　　結果：與對照組相比，實驗組小鼠脊髓星形膠質細胞在IL-17刺激6h和12h時時間點上，NF-κB mRNA和蛋白的表達水平分別顯著升高（p<0.05），與炎性趨化因子IL-6、TNF-α、MCP-1/5和MIP-2的表達趨勢一致；A20蛋白在12h時表達量顯著減少（p<0.05），