IL-17對(duì)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)炎性因子及A20、NF-κB蛋白表達(dá)影響的研究.pdf

1、中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中，星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)維持神經(jīng)系統(tǒng)功能的穩(wěn)定以及正常的信息傳遞具有極其重要的作用；同時(shí)在免疫反應(yīng)以及神經(jīng)疾病的病理生理過(guò)程中，參與神經(jīng)免疫及神經(jīng)組織的發(fā)育與再生修復(fù)，并發(fā)揮重要作用。目前，中樞神經(jīng)損傷的治療依然十分困難，比如脊髓損傷（SCI）的治療。一方面是因?yàn)椋袠猩窠?jīng)系統(tǒng)組織損傷之后，其再生和修復(fù)的能力較弱，因而在受到損傷后若要恢復(fù)正常比較困難；另一方面則是，損傷后的一些病理改變可以促進(jìn)并加劇了損傷部位相關(guān)的炎性反

2、應(yīng)，從而最終影響了脊髓功能的正?；謴?fù)。研究表明，SCI后一系列細(xì)胞炎性因子誘導(dǎo)的繼發(fā)炎性反應(yīng)可加重SCI程度，如水腫、炎癥反應(yīng)、局部缺血、再灌注損傷及過(guò)氧化集團(tuán)異常變化等，從而對(duì)脊髓的正常生理功能造成嚴(yán)重?fù)p傷。在正常的脊髓中，星形膠質(zhì)細(xì)胞為神經(jīng)元的代謝提供支持，但在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，損傷部位的星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活，這些活化后的星形膠質(zhì)細(xì)胞又被稱為反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞，它們可分泌多種炎性因子，如腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素（IL）、干

3、擾素（IFN）等。這些改變進(jìn)一步促進(jìn)了更多的星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活，同時(shí)又可造成大量膠質(zhì)瘢痕的形成。因此，研究相關(guān)炎性因子對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響及作用機(jī)制可以為未來(lái)SCI的臨床治療提供理論依據(jù)，具有重要意義。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：白介素17對(duì)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)相關(guān)炎性因子的影響。
　　目的：研究白介素17對(duì)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生相關(guān)炎性因子的表達(dá)。
　　方法：首先，在體外培養(yǎng)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞。之后，

4、使用不同濃度的IL-17（10、20、50、100、200 ng/ml）刺激體外培養(yǎng)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞，并于不同時(shí)間點(diǎn)（3h、6h、12h、24h和48h）行酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（ELISA）法和qRT-PCR檢測(cè)IL-6、TNF-α、MIP-2、MCP-1/5的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞在IL-17刺激6h和12h時(shí)間點(diǎn)上，IL-6、TNF-α、MCP-1/5和MIP-2所對(duì)應(yīng)的mRNA和蛋白的表達(dá)

5、水平分別顯著升高（p<0.05）。
　　結(jié)論：IL-17刺激小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞之后，可以促進(jìn)其產(chǎn)生和表達(dá)相關(guān)炎性因子，而且還具有明顯的時(shí)效性。
　　第二部分：白介素17對(duì)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)A20、NF-κB調(diào)控蛋白的影響。
　　目的：研究白介素17對(duì)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)A20、NF-κB調(diào)控蛋白的影響。
　　方法：首先，在體外培養(yǎng)小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞。之后，使用IL-17（50ng/ml）刺激體外培養(yǎng)

6、小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞，并于不同時(shí)間點(diǎn)（3h、6h、12h、24h和48h）行蛋白質(zhì)免疫印跡法（WB）和qRT-PCR檢測(cè)A20、NF-κB的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞在IL-17刺激6h和12h時(shí)時(shí)間點(diǎn)上，NF-κB mRNA和蛋白的表達(dá)水平分別顯著升高（p<0.05），與炎性趨化因子IL-6、TNF-α、MCP-1/5和MIP-2的表達(dá)趨勢(shì)一致；A20蛋白在12h時(shí)表達(dá)量顯著減少（p<0.05），