雌激素上調(diào)TWEAK表達(dá)在狼瘡腎炎發(fā)病機(jī)制中作用的研究.pdf

1、目的：雌激素和腫瘤壞死因子樣微弱凋亡誘導(dǎo)劑（TWEAK）在狼瘡腎炎(LN）發(fā)病機(jī)制中均有重要意義，但二者之間的關(guān)系尚不清楚。本研究旨在探討17β雌二醇（E2）對(duì)TWEAK表達(dá)的調(diào)節(jié)作用及其在狼瘡腎炎發(fā)病機(jī)制中的意義。
　　方法：
　　1.體外研究：收集狼瘡腎炎（LN）患者外周血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）并隨機(jī)分為四組：對(duì)照組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中,加入藥物溶解劑二甲基亞砜（DMSO）；E2組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液

2、中，加入1×10-5 mmol/L E2；E2+ICI（雌激素受體拮抗劑）組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中，同時(shí)加入1×10-5 mmol/L E2和1×10-4 mmol/L ICI182，780；E2+MPP（雌激素受體α拮抗劑）組：細(xì)胞培養(yǎng)于正常培養(yǎng)液中，同時(shí)加入1×10-5 mmol/L E2和1×10-2 mmol/L MPP。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)各組PBMCs中TWEAK mRNA的水平。
　　2.體

3、內(nèi)研究：采用MRL/MpJ及MRL/lrp雌性小鼠作為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的模型，將選取符合條件的12周齡的MRL/lrp雌性小鼠進(jìn)行去勢(shì)（卵巢摘除），假手術(shù)組只切除卵巢周圍的脂肪。手術(shù)1周后將MRL/lrp雌性小鼠分為7組，同時(shí)對(duì)上述各組小鼠進(jìn)行藥物干預(yù)。假手術(shù)組：腹腔注射DMSO，每周2次；去勢(shì)對(duì)照組：腹腔注射DMSO，每周2次；E2組：腹腔注射5ug E2，每周2次；E2+ICI組：腹腔注射5ug E2和50ug ICI182，780，每周2

4、次；E2+MPP組：腹腔注射5ug E2和50ug MPP，每周2次；E2+TWEAK-shRNA組：腹腔注射5ug E2和尾靜脈注射2×107 TU TWEAK-shRNA，每周2次；E2+control-shRNA組：腹腔注射5ug E2和尾靜脈注射2×107 TU control-shRNA，每周2次。分別在藥物干預(yù)的第8天、第15天和第29天處死各組小鼠。運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)小鼠腎臟組織TWE

5、AK mRNA及蛋白的表達(dá)水平。運(yùn)用ELISA技術(shù)檢測(cè)小鼠血清中IL-6和抗ds-DNA抗體的水平。另外，取小鼠腎臟組織行HE染色、PAS染色及Masson染色觀察腎臟病理?yè)p害情況。
　　結(jié)果：
　　1.體外研究：與對(duì)照組相比，E2組LN患者PBMCs中TWEAK mRNA表達(dá)量增加，而E2+ICI組和E2+MPP組中TWEAK mRNA表達(dá)量下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　2.體內(nèi)研究：與假手術(shù)組相比

6、，去勢(shì)對(duì)照組小鼠腎臟組織 TWEAK mRNA和蛋白表達(dá)水平下降，E2干預(yù)后小鼠腎臟組織TWEAK mRNA和蛋白表達(dá)水平升高。經(jīng)E2和ICI或 MPP共干預(yù)后，腎臟組織TWEAK mRNA和蛋白表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。另外，與去勢(shì)對(duì)照組小鼠相比，E2組小鼠腎臟組織出現(xiàn)多種病理改變，與此同時(shí)腎臟組織TWEAK mRNA表達(dá)水平及血清IL-6水平升高。而E2+TWEAK-shRNA組小鼠腎臟組織病理?yè)p害減輕，同時(shí)