IFITM3在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及其對MMP9調(diào)控效應(yīng)研究.pdf

1、目的:
　　1、研究干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白3（IFITM3）在原發(fā)性肝癌中的異常表達(dá)并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。
　　2、探討 IFITM3通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)對肝癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。
　　方法:
　　1、通過免疫組織化學(xué)染色法和 Western blot檢測60例肝癌組織及對應(yīng)癌旁組織中 IFITM3和 MMP9的表達(dá)水平并分析相關(guān)性，同時運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 IFITM3的表達(dá)與臨床病理特征的

2、關(guān)系。
　　2、構(gòu)建 IFITM3小干擾 RNA片段（psilencer3.1-shIFITM3），采用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞（ HepG2細(xì)胞系），通過 Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞中 IFITM3蛋白表達(dá)變化，篩選最佳干擾序列。
　　3、將實(shí)驗(yàn)分為空白對照組（Control cells group）、無義序列組（Scrambled siRNA group）、IFITM3 siRNA group，用實(shí)時熒光

3、定量 PCR檢測轉(zhuǎn)染后 IFITM3和MMP9 mRNA的表達(dá)；Western Blot檢測此兩種分子在蛋白水平的表達(dá)；CCK8(cell counting kit8)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖能力；采用Transwell試驗(yàn)和劃痕試驗(yàn)分別觀察轉(zhuǎn)染后的 HepG2細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化。
　　結(jié)果:
　　1、與癌旁組織比較，IFITM3和MMP9在肝癌組織中蛋白的陽性表達(dá)率和表達(dá)量的明顯升高（81.67％ vs.13.33%；88

4、.33% vs.8.33%，均P<0.05）。且IFITM3與MMP9蛋白在肝癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)性（r=0.476， P＜0.01）。
　　2、IFITM3在肝癌組織的表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤包膜侵襲、微血管侵襲、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及和病理分化等級低呈顯著正相關(guān)（P<0.05），而與年齡、性別、肝硬化及 AFP等其他臨床病理特征均無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。
　　3、與其他干擾序列比較， hs-IFITM3-si-

5、2序列干擾 IFITM3表達(dá)效果最佳（P＜0.05）。
　　4、與無義序列組和空白對照組比較，psilencer3.1-shIFITM3轉(zhuǎn)染后，HepG2細(xì)胞IFITM3和MMP9在 mRNA及蛋白水平表達(dá)降低，細(xì)胞增值率和穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少，劃痕實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞融合率明顯降低，以上定量指標(biāo)間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、在原發(fā)性肝癌中 IFITM3高表達(dá)，且與腫瘤大小、腫瘤包膜侵襲、微血