彩絨革蓋菌草酸脫羧酶的誘導(dǎo)機制與發(fā)酵調(diào)控研究.pdf

1、草酸脫羧酶能催化草酸分解產(chǎn)生甲酸和二氧化碳，該酶的應(yīng)用主要集中在造紙廢水中的草酸鹽降解，草酸生物檢測等方面。然而，目前草酸脫羧酶的低產(chǎn)量限制了該酶的應(yīng)用。為了了解該酶的誘導(dǎo)機制，提高酶產(chǎn)量，本論文研究了草酸對彩絨革蓋菌誘導(dǎo)產(chǎn)酶的條件，并對該酶的破碎提取條件進行優(yōu)化，測定了酶的穩(wěn)定性;后期利用發(fā)酵罐進行了放大研究，另外嘗試使用植酸作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)產(chǎn)酶以及將麥稈水解液作為碳源培養(yǎng)菌絲體以提高酶產(chǎn)量。
　　 本課題首先對彩絨革蓋菌的誘導(dǎo)

2、條件進行優(yōu)化，主要研究草酸濃度對產(chǎn)量的影響，然后利用分批添加草酸和補料來提高酶產(chǎn)量。通過測定菌體生長過程中的不同參數(shù)（例如酶活、蛋白含量、生物量等）來比較不同誘導(dǎo)條件下的產(chǎn)酶優(yōu)劣，其中10 mM酶活最高，為12.6 U/L發(fā)酵液，20 mM蛋白比酶活最高，為27.54U/mg，20 mM為草酸最佳誘導(dǎo)濃度;通過分批添加草酸誘導(dǎo)技術(shù)，酶活最高可達1086 U/L發(fā)酵液，是單次誘導(dǎo)的86倍，蛋白比酶活達65，6 U/mg;補料后酶活可達20

3、60U/L發(fā)酵液，蛋白比酶活達75.2 U/mg。利用發(fā)酵罐培養(yǎng)彩絨革蓋菌，4 L/min的通氣量和pH5.0為較好的培養(yǎng)條件，添加草酸誘導(dǎo)后pH3.5對產(chǎn)酶有利。以草酸直接調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH值并誘導(dǎo)產(chǎn)酶可保持較穩(wěn)定的酶產(chǎn)量。
　　 本課題還對彩絨革蓋菌的破碎條件及草酸脫羧酶的提取條件進行了優(yōu)化，采用超聲破碎法以工作／休息時間比為6 s/4 s為佳，可以達到液氮冷凍研磨法98％的破碎效率，采用吐溫-80可以略微提高緩沖液對菌絲碎片的