蟲草菌粉對矽肺兔轉(zhuǎn)化生長因子-β1及其信號傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、背景：矽肺病主要是由于在生產(chǎn)過程中長期吸入含有二氧化硅較高的粉塵所引起的以肺纖維化病變?yōu)橹饕∽兊囊环N肺部疾病。無論是從接觸粉塵的人數(shù)還是從新發(fā)矽肺病人數(shù)及現(xiàn)患病人數(shù)來講，中國都是排在前列。矽肺的發(fā)病機理至今還不完全清楚，它可能涉及到由多種細(xì)胞及其組分參與的細(xì)胞毒作用、局部炎癥反應(yīng)、病態(tài)增殖、免疫損傷及修復(fù)等多個病理過程，而在其病變發(fā)生發(fā)展過程中，近年來，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，其起最關(guān)鍵性作用的細(xì)胞因子就是TGF-β，其中TGF-β1為TGF

2、-β家族中最重要的致纖維化亞型，而Smad3、Smad7蛋白是 TGF-β-Smads信號通路的下游蛋白，其異常表達在肺纖維化發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
　　矽肺病治療方法包括藥物治療及大容量肺泡灌洗等，藥物治療包括克矽平、漢防己甲素、維生素E、亞硒梭鈉、葡萄酸鋅等，然而這些藥物療效已證實不太令人滿意，大容量肺泡灌洗雖有一定療效，但大體上亦不能改變矽肺病的進程，且選例要求較嚴(yán)格，手術(shù)風(fēng)險、手術(shù)費用均是患者及家屬所要考慮的大問題。尋

3、求新的藥物對此病的防治刻不容緩。
　　冬蟲夏草用于治療慢性肺疾病已有千年歷史，長期以來被視為珍貴的強壯滋補中藥，研究認(rèn)為冬蟲夏草具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、抗炎及抗菌等作用功能。蟲草菌粉化學(xué)成分和藥理作用均與天然蟲草相似，系青海產(chǎn)新鮮冬蟲夏草中分離所得的蟲草菌，此藥物已應(yīng)用于臨床多年，對多種疾病包括呼吸系統(tǒng)病均有防治作用，近年來有研究表明，蟲草菌粉對肝、腎組織纖維化具有干預(yù)作用，亦有個別報道其能抑制肺纖維化的作用，但目前臨床上還

4、無其應(yīng)用于矽肺病防治及其作用機制方面的報道。
　　目的：應(yīng)用蟲草菌粉對矽肺兔模型建立進行干預(yù)，并對之進行治療，通過檢測各組兔肺組織病理及羥脯氨酸、TGF-β1、Smad3、Smad7等指標(biāo)，探討蟲草菌粉在矽肺纖維化過程中對肺的防治作用，并就其對肺防治作用機制進行探討，為預(yù)防和控制矽肺病提供理論依據(jù)。
　　方法：實驗第一部分：30只雄性大耳白兔隨機分為空白對照組、干預(yù)組、矽肺組3組，每組10只。從造模前半月干預(yù)組每天予以蟲草菌

5、粉液喂飲，其余兩組以等體積生理鹽水喂飲，其它飼養(yǎng)方法相同。干預(yù)組和矽肺組從氣管內(nèi)注入二氧化硅粉塵懸液制作矽肺兔模型，空白對照組從氣管內(nèi)注入生理鹽水。30d后處死所有兔，測量兔肺干重，制作病理切片，用加堿水解法測定各組兔肺組織的羥脯氨酸含量，應(yīng)用實時熒光定量 PCR法測各組兔肺組織 TGF-β1mRNA及Smad7mRNA的表達水平；
　　實驗第二部分：30只雄性大耳白兔隨機分為對照組、模型組、治療組3組，每組各10只。模型組和治療

6、組兔氣管內(nèi)注入二氧化硅粉塵懸液制作矽肺兔模型，對照組氣管內(nèi)注入生理鹽水。從造模后第30天開始治療組每天予以蟲草菌粉液喂飲，對照組及模型組以等體積生理鹽水喂飲，其它飼養(yǎng)方法相同，共計4個月，5個月后處死全部兔。測量肺干重，制作病理切片，用加堿水解法測定各組兔肺組織的羥脯氨酸含量，ELISA法測定支氣管肺泡灌洗液中 TGF-β1含量，應(yīng)用實時熒光定量 PCR法測各組兔肺組織 TGF-β1mRNA、Smad3mRNA及Smad7mRNA的表達

7、水平。
　　結(jié)果：實驗第一部分：病理切片示空白對照組為正常肺組織，矽肺組見肺組織明顯纖維化并有矽結(jié)節(jié)形成，干預(yù)組雖然也有上述改變，但程度較輕；矽肺組、干預(yù)組肺干重及肺組織羥脯氨酸的含量高于空白對照組，矽肺組肺干重和肺組織羥脯氨酸的含量高于干預(yù)組；矽肺組和干預(yù)組兔肺組織 TGF-β1 mRNA表達水平均低于空白對照組，矽肺組兔肺組織TGF-β1 mRNA表達水平低于干預(yù)組，矽肺組和干預(yù)組兔肺組織 Smad7 mRNA表達水平高于空白

8、對照組，矽肺組兔肺組織Smad7mRNA表達水平高于干預(yù)組。(注：TGF-β1 mRNA、Smad7 mRNA表達水平均采用ΔΔCt值進行統(tǒng)計學(xué)分析。)
　　實驗第二部分：病理切片示對照組為正常肺組織，模型組兔肺可見肺泡結(jié)構(gòu)破壞，可見大量的大小不一的矽結(jié)節(jié)，以Ⅲ-Ⅳ級矽結(jié)節(jié)為主，部分融合成片，治療組主要以肺泡炎及纖維化改變?yōu)橹鳎梢姶笮〔灰晃Y(jié)節(jié)，但以Ⅰ-Ⅱ為主，未見明顯融合，矽結(jié)節(jié)計數(shù)評分模型組高于治療組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意

9、義；模型組、治療組肺干重和肺組織羥脯氨酸的含量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，模型組肺干重和肺組織羥脯氨酸的含量高于治療組；模型組和治療組支氣管肺泡灌洗液TGF-β1含量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；且模型組高于治療組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；模型組、治療組兔肺組織TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA表達水平均低于對照組，模型組兔肺組織TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA表達水平低于治療組，模型組、治療組兔肺組織Smad7 mR