普羅布考對同型半胱氨酸誘導(dǎo)的炎性單核細胞分化的影響及其機制的探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究顯示高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocysteinemia,HHcy)可促進炎性單核細胞(Monocytes,MCs)亞群的分化,氧化應(yīng)激可能參與此過程。普羅布考作為抗氧化劑,具有顯著的逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化(AS)斑塊的作用。普羅布考可否通過抗氧化作用調(diào)節(jié)HHcy誘導(dǎo)的炎性單核細胞亞群的分化尚不清楚。因此,我們探討普羅布考對同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)誘導(dǎo)的炎性單核細胞亞群分化及炎性單核細胞亞

2、群內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影響。研究普羅布考對Hcy誘導(dǎo)的THP-1細胞內(nèi)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate,NADPH)氧化酶的影響。
  方法:
  利用8周齡野生型C57BL/6小鼠脾臟制備原代單細胞懸液進行培養(yǎng)。脾臟單細胞懸液以γ-干擾素(Recombinant interferon-γ

3、,rIFN-γ)誘導(dǎo)單核細胞分化,以L-Hcy刺激,觀察其對單核細胞亞群分化的影響,以普羅布考及apocynin干預(yù),觀察其對單核細胞亞群分化的影響。收集細胞,以抗CD11b-PE、Ly-6C-FITC抗體在冰上孵育30分鐘,BD FACS Calibur檢測單核細胞亞群分化的情況。與淋巴細胞及中性粒細胞比較,單個核細胞(Mononuclear cells,MNCs)顆粒較少,反映為較低的側(cè)向角散射(Side scatter,SSC),

4、體積較大,反映為較大的前向角散射(Forwardscatter,F(xiàn)SC)。單核細胞被定義為CD11 b+MNCs,并根據(jù)單核細胞表面抗原Ly-6C的表達量,將單核細胞分為Ly-6Chi、Ly-6Cmid、Ly-6Clow單核細胞三個亞群。以2',7'-二氯熒光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluorescein-diacetate,DCFH-DA)探針分別檢測Ly-6C+和Ly-6C單核細胞中ROS的水平,含有DCFH-DA的

5、Ly-6C+和Ly-6C-單核細胞被定義為DCFH-DA+細胞。利用細胞NADPH氧化酶檢測試劑盒在多功能酶標(biāo)儀上檢測人單核細胞內(nèi)NADPH氧化酶活性。結(jié)果以均數(shù)±SEM表示。組間比較運用獨立樣本t檢驗。P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。
  結(jié)果:
  100、200、500μmol/L的L-Hcy濃度依賴性地促進脾臟原代細胞Ly-6Chi和Ly-6Cmid炎性單核細胞的分化,而作為含硫氨基酸對照的半胱胱氨酸(L-Cystei

6、ne,L-Cys)對Ly-6Chi和Ly-6Cmid炎性單核細胞的分化沒有影響。Apocynin顯著抑制L-Hcy誘導(dǎo)的Ly-6Chi和Ly-6Cmid炎性單核細胞亞群的分化,同時,25、50、100μmol/L的普羅布考可濃度依賴性地抑制L-Hcy誘導(dǎo)的Ly6Chi單核細胞亞群的分化。我們進一步發(fā)現(xiàn)Ly6C+單核細胞亞群中ROS的水平約為Ly6C-單核細胞亞群的1.9倍,100、200、500μmol/L的L-Hcy濃度依賴性地增加L

7、y-6C+單核細胞亞群內(nèi)ROS的產(chǎn)生,而對Ly-6C-單核細胞亞群中ROS的水平?jīng)]有影響。L-Cys作為含硫氨基酸對照未能改變Ly6C+單核細胞亞群及Ly-6C-單核細胞亞群中ROS的水平。Apocynin顯著抑制了L-Hcy誘導(dǎo)的Ly6C+單核細胞亞群中ROS的水平,同時,25、50、100μmol/L的普羅布考濃度依賴性地抑制L-Hcy誘導(dǎo)的Ly6C+單核細胞亞群中ROS的水平。普羅布考及apocynin均未能改變Ly-6C-單核細

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