LOXL2通過催化H3K4去甲基化上調E-cadherin表達而促進宮頸癌轉移.pdf

1、目的：研究賴氨酰氧化酶樣蛋白-2(LOXL2)在宮頸癌組織中的表達情況及其對宮頸癌細胞的生長、增殖、凋亡及侵襲轉移能力的影響，并深入研究與其相關的分子生物學作用機制，篩選出臨床實用的腫瘤基因診斷標志物，尋找更有效的小分子靶向抑制劑，改善宮頸癌患者的遠期預后。
　　方法：1、采用免疫組織化學和Real Time RT-PCR的方法檢測LOXL2及E-cadherin蛋白在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的表達量。2、運用慢病毒轉染技術構建

2、穩(wěn)定表達sh-LOXL2和sh-control基因型的宮頸癌細胞系。3、通過平板克隆實驗來檢測不同表達量的LOXL2對宮頸癌C33a細胞增殖能力的影響。4、采用流式細胞術檢測Hela-shLOXL2和Hela-shcontrol細胞在加順鉑處理和不加順鉑處理時的細胞凋亡率，分析LOXL2對宮頸癌細胞凋亡的影響。5、通過Transwell腫瘤細胞遷移實驗來檢測不同表達量的LOXL2對宮頸癌Hela細胞侵襲和遷移能力的影響。6、采用小鼠原位

3、宮頸癌移植模型來檢驗LOXL2的高低表達對小鼠宮頸癌組織增殖和侵襲轉移的影響。7、采用染色質免疫共沉淀（X-CHIP）技術來檢測LOXL2在宮頸癌細胞中結合的染色質基因片段。8、運用Real Time RT-PCR和Western Blot的方法檢測LOXL2、H3K4me1、H3K4me2、H3K4me3、CDH1、E-cadherin、VEGF-C、LYVE1在宮頸癌細胞中的mRNA和蛋白表達量。9、運用小鼠原位宮頸癌移植模型來檢測

4、AB0023和青霉胺是否能抑制LOXL2的生物學效應，改善患病小鼠的遠期預后。
　　結果：1、LOXL2在宮頸癌組織中的表達量明顯高于正常的宮頸組織，而E-cadherin的表達量則與其相反；2、高表達的LOXL2能夠促進宮頸癌細胞的過度增殖，并增強宮頸癌細胞的侵襲和轉移能力；3、高表達的LOXL2顯著增加了小鼠原位宮頸癌模型的淋巴結轉移率；4、CHIP測序結果證實LOXL2結合在CDH1基因啟動子區(qū)域的近端；5、LOXL2通過催

5、化H3K4me3去甲基化，抑制CDH1基因的表達，誘發(fā)EMT；上調Akt通路中VEGF-C的表達，促進血管和淋巴管的生成，最終導致腫瘤細胞的遠處侵襲和轉移；6、特異性LOXL2單克隆抗體AB0023通過靶向抑制LOXL2，改善小鼠原位宮頸癌模型的遠期預后。
　　結論：LOXL2在宮頸癌組織中異常高表達，通過催化組蛋白H3K4me3過度去甲基化，破壞H3K4甲基化與去甲基化之間的平衡，改變染色質基因結構域的結構狀態(tài)，促使某些癌基因或