LOXL2在膽管癌侵襲和轉(zhuǎn)移中作用的初步研究.pdf

1、膽管癌是常見的膽道惡性腫瘤之一，其發(fā)病數(shù)有呈逐年上升的趨勢，而影響其治療和病人遠期生存率的主要因素是腫瘤的局部浸潤和轉(zhuǎn)移。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是多基因參與、多步驟完成的復(fù)雜過程，其中腫瘤細胞粘附、運動能力的改變，與細胞外基質(zhì)間的相互作用是腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，也是腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。探討影響這些關(guān)鍵環(huán)節(jié)的調(diào)控因素將有助于我們更深入的理解膽管癌侵襲和轉(zhuǎn)移的機制。 賴氨酰氧化酶樣蛋白-2(Lysyl Oxidase Like-2

2、Protein，LOXL2)是賴氨酰氧化酶(lysyl oxidase，LOX)家族的成員之一，基因定位于8p21.2-p21.3。Kirschmann等最初報道了在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中有LOXL2的參與，在具有侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的乳腺癌來源的細胞系中LOXL2蛋白呈高表達，且LOXL2蛋白的表達上調(diào)與乳腺腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移潛能具有相關(guān)性。后來的研究結(jié)果也證實LOX2的高表達與腫瘤侵襲呈正相關(guān)，甚至在MDCK(一種低轉(zhuǎn)移潛能的乳腺癌細胞系)細胞系

3、中LOXL2過表達可誘導(dǎo)完整的上皮一間葉樣表型轉(zhuǎn)化( Epithelial-Mesenchymal transition.EMT)。在LOXL2-shRNA表達的惡性腫瘤中采用RNAi技術(shù)沉默LOXL2基因表達后能促使腫瘤生長速度減慢，同時伴隨著腫瘤細胞凋亡的增加，這些結(jié)果使LOXL2基因的重要生物學(xué)特性得到證明。 能否將LOXL2作為一種新的判斷膽管癌或者是腫瘤預(yù)后的一個分子標志？深入研究LOXL2在膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用，有助

4、于我們更深刻的理解腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生、發(fā)展機制，從而為干預(yù)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移提供新的靶點。 本課題正是基于LOXL2可能是判斷膽管癌預(yù)后的一個新的分子標志，它可能調(diào)控著腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)鍵環(huán)節(jié)的設(shè)想，我們以臨床膽管癌組織標本和膽管癌QBC939細胞為研究對象，研究其在膽管癌浸潤和轉(zhuǎn)移中的作用及其可能的分子機制，也同時為深入研究腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的調(diào)控機制尋求新的思路和更多的理論依據(jù)。 主要研究內(nèi)容與方法: 1.膽管癌組織LO

5、XL2的表達及其與臨床惡性表型間關(guān)系。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測LOXL2在臨床膽管癌組織標本中的表達情況，并分析其與膽管癌臨床、病理參數(shù)的關(guān)系。 2.沉默LOXL2基因表達后對腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達的影響。運用RNAi技術(shù)，沉默膽管癌QBC939細胞中LOXL2的表達，觀察膽管癌細胞中腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白CD44，MMP-9的表達變化情況。膽管癌QBC939細胞中CD44，MMP-9蛋白的表達用免疫組織化學(xué)的方法進行檢測。 結(jié)果

6、與討論: 膽管癌組織中LOXL2的過表達與腫瘤有無發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤的分化程度差異無關(guān)。此研究結(jié)果表明，LOXL2的過度表達可能與膽管癌的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)，其過度表達或許可以作為膽管癌預(yù)后的一個分子標志。 RNAi沉默膽管癌QBC939細胞LOXL2基因表達后，膽管癌QBC939細胞中CD44、MMP-9蛋白的表達較之空質(zhì)粒陰性對照組明顯下降。提示LOXL2可能在轉(zhuǎn)錄水平通過以

7、下環(huán)節(jié)調(diào)控腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移：①LOXL2高表達促進CD44的表達，可相應(yīng)增強膽管癌細胞與細胞外基質(zhì)的粘附能力，膽管癌細胞粘附能力的提高促使了癌細胞對細胞外基質(zhì)和基底膜的粘附，進而促進腫瘤細胞侵襲，轉(zhuǎn)移的發(fā)生；②LOXL2的高表達可以通過細胞內(nèi)某些重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增強MMP-9的表達而促進細胞外基質(zhì)的降解，從而促進腫瘤的轉(zhuǎn)移。 結(jié)論: 1.LOXL2的過度表達可能與膽管癌的侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)，可以作為判斷膽管癌惡性程度的一