人肝外膽管癌神經浸潤與轉移的初步研究.pdf

1、膽管癌是消化系統(tǒng)重要的惡性腫瘤。其惡性度高、診治困難、預后不良，嚴重威脅人類的健康。目前認為，根治性手術切除是膽管癌惟一有效的治療手段。盡管近年來診療技術有了較快發(fā)展，但其5年存活率仍然只有5％左右，主要原因是術后極易復發(fā)。 浸潤和轉移是惡性腫瘤重要的生物學特性，也是腫瘤重要的預后因素之一。傳統(tǒng)認為，惡性腫瘤的轉移途徑主要有四種：局部浸潤、血道轉移、淋巴轉移和腹腔廣泛種植。 本研究旨在前期研究結果的基礎上，對膽管癌的神經

2、浸潤和轉移的生物學特性進行初步的研究和探索，著重探討神經生長因子在此過程中的作用，以期能夠為臨床治療研究提供備選分子靶點，并對這一較為特殊的現(xiàn)象有所認識和總結。 第一部分：神經生長因子與膽管癌臨床病理特征的相關性分析 論文1：膽管癌神經浸潤的臨床病理分析 目的:總結分析膽管癌神經浸潤的臨床病理特點，與腹痛或背痛、淋巴轉移、病理類型以及腫瘤分期的關系。 結論 1.神經浸潤與膽管癌的病理低分化、淋巴轉

3、移以及TNM分期密切相關，是膽管癌的重要病理特征之一，可能有助于判斷膽管癌的預后。 2.神經浸潤是膽管癌發(fā)生中的早期事件，提示膽管癌是一種高惡性、高浸潤性生長的腫瘤。 3.疼痛產生的原因是多方面的，神經浸潤可能是其中重要原因之一，單純靠疼痛這一單一因素，不能判斷有否神經浸潤。 論文2：神經生長因子與人膽管癌神經浸潤的相關性研究 目的:探討神經生長因子及其酪氨酸激酶受體A與人膽管癌神經浸潤、淋巴轉移、病理類

4、型以及腫瘤分期的關系。 結論 1.NGF與膽管癌神經浸潤密切相關，也與腫瘤的TNM分期密切相關。檢測膽管癌組織NGF的表達情況，可能有助于判斷預后。 2.NGF可能通過旁分泌途徑與TrkA作用促使癌細胞延神經轉移；通過自分泌途徑促進膽管癌細胞增殖。 第二部分：穩(wěn)定表達神經生長因子的膽管癌細胞的建立與培養(yǎng) 論文3.神經生長因子真核表達載體的構建及鑒定 目的:構建人β-NGF真核表達載體并鑒定，

5、為轉染膽管癌細胞奠定實驗基礎。 結論:成功構建β-NGF真核表達載體pcDNA3.0-NGF，可用于后續(xù)試驗。為研究NGF在膽管癌細胞中的作用奠定試驗基礎。 論文4.pcDNA3.0-NGF轉染人膽管癌細胞及其鑒定 目的:進一步檢測pcDNA3.0-NGF質粒的構建結果；建立能穩(wěn)定表達NGF蛋白的人膽管癌QBC939細胞。 結論 1.轉染pcDNA3.0-NGF后確能增強β-NGF在膽管癌細胞QB

6、C939中的表達，進一步證實此前的質粒構建工作是成功的。 2.成功建立能夠高表達NGF的膽管癌細胞，為研究NGF在膽管癌細胞中的作用奠定試驗基礎。 第三部分：神經生長因子對人膽管癌細胞體外增殖活性和侵襲力的影響 論文5：神經生長因子對人膽管癌細胞體外增殖活性和侵襲力的影響 目的:探討膽管癌細胞源性神經生長因子對人膽管癌細胞系QBC939體外增殖活性和侵襲力的影響。 結論:膽管癌細胞源性的β-NGF

7、具有促進膽管癌細胞系QBC939體外增殖活性和侵襲力的作用。 第四部分：神經生長因子對人膽管癌細胞裸鼠體內成瘤及轉移能力影響的研究 論文6：神經生長因子對人膽管癌細胞體內成瘤及轉移能力的影響 目的:探討膽管癌細胞源性神經生長因子對人膽管癌細胞系QBC939體內成瘤及轉移能力的影響。 結論 1.膽管癌細胞源性神經生長因子具有增強膽管癌細胞成瘤能力的作用。 2.高表達神經生長因子的膽管癌細胞成

8、瘤速度快，易發(fā)生遠處轉移，與腫瘤預后密切相關。 小結 本研究首先通過對臨床病例和病理標本的檢測分析，探討NGF與膽管癌臨床病理特征之間的關系，進而通過體內、體外實驗研究NGF在膽管癌發(fā)展中的作用。通過以上研究結果的分析，得出以下結論： 1.38％(35/92)的肝外膽管癌可出現(xiàn)神經浸潤，且神經浸潤與腫瘤的淋巴轉移、低分化水平以及TNM分期緊密相關，是影響腫瘤預后的重要因素。 2.神經生長因子高表達于膽管癌組

9、織，其表達強度與膽管癌的神經浸潤、低分化水平、淋巴轉移以及TNM分期密切相關，提示NGF可能是參與膽管癌神經浸潤和惡性進展的重要細胞因子。由于NGF的高親和力受體TrkA亦表達于膽管癌細胞膜，從而提示，膽管癌細胞可能通過自分泌途徑促進自身的增殖與侵襲。 3.轉染β-NGF基因后的膽管癌細胞，其增殖活性和侵襲力顯著增強，且與膽管癌細胞β-NGF的表達量正相關，呈量-效依賴關系。 4.腫瘤細胞源性β-NGF能夠顯著縮短膽管癌

10、細胞在裸鼠體內的成瘤時間，提高其成瘤速度，增強膽管癌的生長及遠處轉移能力。 5.由于目前尚無判斷膽管癌預后的有效臨床檢測指標，NGF的檢測可能有助于判斷膽管癌的預后。 本研究所做工作具有如下創(chuàng)新性： 1.通過對92例膽管癌病人的臨床資料和病理學分析，明確闡述了神經生長因子與人肝外膽管癌病理特征之間的關系：神經生長因子與膽管癌的神經浸潤、細胞低分化、淋巴轉移以及TNM分期密切相關。 2.神經浸潤是膽管癌發(fā)展