ErbB4在膽管癌中的表達變化及作用研究.pdf

1、目的:檢測表皮生長因子受體-4(ErbB4)在人肝內膽管癌(ICC)組織、癌旁組織和結石性肝內膽管組織中的表達情況，分析ErbB4的表達與肝內膽管癌臨床病理的關系。并進一步觀察表皮生長因子絡氨酸激酶抑制劑對膽管癌細胞株QBC939增殖及凋亡的影響。初步探討ErbB4在膽管癌發(fā)生發(fā)展及轉移中的作用與機制，為ICC臨床診治及預后判斷提供思路。
　　方法:1.收集湖南省人民醫(yī)院肝膽外科2010年4月至2014年11月期間部分進行手術切除

2、的肝內膽管標本，實驗分三個組:腫瘤組為30例肝內膽管癌組織標本;癌旁組是對應的距離腫塊1cm外的膽管組織標本;結石組為10例結石性肝內膽管組織標本。采用免疫組化方法（SP法）檢測三組中ErbB4的表達，并分析三組之間ErbB4表達的差異性及其與臨床病理指標間的關系。
　　2.體外培育人膽管癌細胞株QBC939，免疫細胞化學方法檢測QBC939細胞中ErbB4的表達。表皮生長因子絡氨酸激酶抑制劑AG1478在不同時間(24h，48h

3、，72h)，不同濃度(0，0.1，1，10，100μg/ml)條件下干預QBC939細胞，噻唑藍比色法(MTT)法檢測細胞生長增殖抑制情況，流式細胞術測定細胞凋亡及細胞周期結果。
　　結果:1.ErbB4強陽性表達率在腫瘤組中為83.3％，癌旁組為36.7％，結石組為20.0％，三組間表達差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。而且其差異性主要表現(xiàn)在細胞核上的表達，腫瘤組顯著高于癌旁組及結石組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);而在細胞

4、膜及細胞質中，三組間表達差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。
　　2.在肝內膽管癌組織中ErbB4異常高表達與腫瘤臨床TNM分期及淋巴結轉移相關（均p＜0.05）。
　　3.免疫細胞化學顯示ErbB4在膽管癌細胞株QBC939中呈陽性表達，主要表達于細胞質中。
　　4.抑制劑AG1478能抑制QBC939細胞增殖，而且抑制劑濃度越高、作用時間越長其抑制效果越顯著，其中IC50(24h)為55.98μg/ml，IC50(4

5、8h)為32.48μg/ml, IC50(72h)為20.85μg/ml。
　　5.流式細胞術檢測結果顯示抑制劑AG1478(20μg/ml)處理不同時間后，QBC939細胞均表現(xiàn)為不同程度的S期阻滯，對照組S期占11.264％，24h組占14.764％，48h組占19.934％，72h組占39.392％，而且72h組細胞完全阻滯在S期。QBC939細胞的凋亡率也逐漸增加，對照組凋亡率為4.503％，24h組為9.145％，48h